甲状腺转录因子-1对鸡胚尿囊膜血管生成的实验研究

　　3  结果

　　3.1  TTF1各组对CAM血管数目生长的影响TTF1不同剂量组和PBS组作用CAM后，给药组CAM血管数目较PBS组明显减少，有明显差异，具有统计学意义（P<0.05或P<0.01），提示TTF1具有一定的抑制血管生成的作用。结果见表1。表1  不同剂量TTF1对CAM血管数目的影响（略）

　　3.2  形态学观察在解剖显微镜下，可见PBS组血管网络清晰，呈叶脉样，放射性生长，主血管粗壮，长势旺盛。TTF1剂量组的血管生成明显受抑，载体周围血管网模糊，颜色变浅、苍白，血管分枝处多处断裂，密度减少，个别CAM实验作用部位的新生血管结构破坏，甚至未见血管。结果见图1。

　　4  结果
   
　　自20世纪70年代Folkman首先提出抗血管生成(anti-angiogenesis)理论至今，人们对血管形成的机制等方面的研究已取得较大进展。有关研究表明，恶性肿瘤的无限制侵袭性生长及其转移依赖于血管新生，血管新生是指在血管周围生成毛细血管的过程。在正常情况下，宿主能控制血管新生，机体在短时间内打开或关闭控制系统，但是肿瘤组织缺乏控制血管新生的调节机制，因而，控制正常组织血管新生的机制不能控制肿瘤的血管新生［5］。当肿瘤体积增至2～3 mm3时，肿瘤已不能单纯依靠弥散获取氧气及营养物质，如果无新生毛细血管长入，则肿瘤组织将保持休眠状态或发生退化，因此，控制血管新生已成为治疗肿瘤的一个靶点。
  
　　鸡胚绒毛尿囊膜(chicken chorioallantoic mem．Brahe，CAM)是研究血管形成与抗血管形成的理想体内模型，以鸡胚绒毛尿囊膜研究血管新生药物的体内模型成为热点问题［6］。一般情况下，血管新生主要发生在胚胎发育过程中，在某些病理情况下，如损伤修复、炎症等也常伴随发生血管新生，特别是肿瘤生长和转移与血管新生密切相关。在血管生成实验中，主要的体内实验有CAM和卵黄囊膜法等，在众多血管生成模型中CAM因实验材料易得，操作简便，实验周期短及结果易于观察等优点，成为研究药物抗血管生成作用的最常用体内模型。有研究显示，鸡胚发育的第8～12天，这一时期CAM中的血管生长处于高峰状态［7］。因此，本实验研究选择鸡胚培育的第8天给药，以观察TTF1抑制血管生长的影响。研究发现TTF1对血管生成有明显的抑制作用。但是，对鸡胚尿囊膜血管的新生作用机制尚不明确，药物究竟影响了血管新生通路的哪些环节发挥的作用，是影响了血管新生的关键因子血管内皮生长因子(VEGF)形成和释放，还是影响MAKP信号转导通路中的ERK通路，这些问题有待于进一步研究。

【参考文献】
  　　［1］张学武，张玉梅，关丽萍，等.珍珠梅活性成分的提取分离及体内抑瘤作用的研究［J］.中药材,2004,27(1): 36.

　　［2］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海:上海科学技术出版社，1994: 8.

　　［3］呼 群，宁 涛，苏秀兰.鸡胚绒毛尿囊膜技术的改进［J］. 北京大学学报(医学版)，2001，33(4)：383.

　　［4］贺国安，罗进贤，张添元，等．改进的鸡胚绒毛尿囊膜技术-无气室孵育法.［J］中山大学学报(自然科学版)，2003，42(2)：126.

　　［5］薛庆善. 体外培养的原理与技术［M］．北京：科学出版社，2001: 2.

　　［6］Waltenberger J，Claessen-Welsh L，Siegbahn A,et al. Different signal transduction properties of KDR and Fit-1，two recptors for vascular endothelial growth factor J［J］. J Biol Chem，1994，269: 26988.

　　［7］Hasan J，Shnyder SD，Bibby M，et a1.Quantitative anglogenesis assays in vivo-a review［J］.Angiogenesis，2004，7(1): 1.