甲醇-超声法提取洋铁酸模有效成分的研究
3 结果与讨论
3.1 蒽醌标准品的工作曲线制作及浓度检测将峰面积Y对浓度X作图，经过spss11.0处理，得3条工作曲线的方程。
大黄素：Y（峰面积），X（浓度）(m/z 283.0 / 240.1): Y= 2 159.98 X+20 668.25 (r = 0.999 6 )；大黄酚：Y（峰面积），X（浓度）(m/z 252.8 / 224.9): Y= 43X+ -2.03e+003 (r=0.996 5)；大黄素甲醚：Y（峰面积），X（浓度）(m/z 283.0 / 240.1): Y= 20.5X+ -921(r=0.998 1)。其中大黄素浓度在0.3～10 ng/ml之间时具有较好的线性关系；大黄酚和大黄素甲醚在3～100 ng/ml时有良好的线性关系。3条标准曲线R>0.99值均接近1，可以用来作为工作曲线。表1 为两种方法提取3种游离蒽醌的抽提率比较。两种抽提方法分别为甲醇超声法（methanol-ultrasonic）和乙醇提取法（ethanol exraction）。苷类通常在经过1 h酸水解后，会完全转化为苷元［6］。而本试验选用2 h酸水解，以确保其完全水解。表 2 为水解后蒽醌浓度减去水解前的蒽醌浓度得到的蒽醌苷类的提取率。表1 两种方法提取3种游离蒽醌的抽提率比较，表2 蒽醌苷类的提取率（略）。
3.2 游离蒽醌和蒽醌苷类提取方法的比较图2为两种方法游离蒽醌提取率的柱状分析图，纵坐标为提取率，横坐标为提取方法。图中可见3种游离蒽醌在甲醇超声提取法中的提取率都高于乙醇提取法，总提取率是后者4倍。在甲醇超声提取法中大黄素是大黄酚和大黄素甲醚的3倍，说明洋铁酸模的游离蒽醌主要以大黄素的方式存在。
图3为蒽醌苷类提取率的柱状图比较，纵坐标为提取率，横坐标为提取方法。图中可见甲醇-超声提取法在3种蒽醌苷类组分的提取率高于乙醇提取法6倍。
甲醇-超声提取法的蒽醌苷类含量也高于乙醇提取法，其中大黄酚的含量高于大黄素和大黄素甲醚。这说明在蒽醌苷类物质中，大黄酚苷是主要的存在方式。在游离形态下，蒽醌类物质更多的以大黄素存在；在结合形态下，蒽醌类物质以大黄酚的形态存在。以上两点可以说明，在洋铁酸模根中，大黄素溶解度较好，具有两个羟基，可以更稳定的存在，而最终的产物是大黄酚苷。大黄素甲醚无论何种情况下含量都很少，说明大黄素甲醚是一种次级代谢产物的中间体。以上结果还表明，蒽醌苷类的含量要远远高于游离蒽醌的含量，证明洋铁酸模中蒽醌类物质主要以苷类的方式存在。
3.3 HPLC－MS法在蒽醌类物质提取时的可靠性和适用性液质联用法对于游离蒽醌的跟踪检测比普通高效液相法具有优势。蒽醌类和蒽醌苷类因为具有相同的生色团而有近似的紫外吸收光谱，因而单高效液相法会产生较大的误差。蒽醌苷衍生物较多，糖链连接方式和长度都难以确定，因此将蒽醌苷类水解成相应的游离物再进行液质法跟踪检测能准确得到蒽醌苷类的物质含量。
此外，通过液质联用方法检测蒽醌类物质的含量可以更加简化研究的方法，精确度更高，检测限更低，能够达到10-9 g，传统高效液相检测法［8］的不足是物质衍生物容易出现紫外干扰，蒽醌类物质的紫外吸收峰多在一起，且保留时间由于化学结构的接近而分离较窄。通过液质联用法可以对专一的离子对进行分析，不受紫外吸收杂峰的干扰，这是单一的高效液相系统不能达到的。
本研究选用甲醇超声法，得到的产物为干粉状物质，对照乙醇抽提法的到的浸膏状物质有利于进一步的分级提取。并且甲醇-超声抽法提取率高，能够充分利用羊蹄植物资源，为今后的羊蹄类植物开发奠定了基础。
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