黄芪药材中黄芪甲苷含量的荧光分光光度法测定

　　2.5  稳定性实验取同一对照品溶液，照“2.2”项下制备方法操作，分别在0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，3.0 ，6.0 h检测，测得黄芪甲苷荧光强度分别为308.2，308.5，303.3，304.7，304.1，302.9，289.1，RSD为2.15%，结果表明对照品溶液在室温下放置6h内稳定性良好。

　　2.6  重复性实验取同一批药材，精密称取平行样品6份，每份0.2 g，照“2.2”项下制备方法操作，连续6次平行测定，RSD为1.41%，表明方法重复性良好。

　　2.7  回收率实验采取加样回收法，精密称取5份已知含量的同一批样品0.2 g，精密加入黄芪甲苷对照品溶液20μl（1.0 mg·ml-1），照“2.2”项下处理并测定。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）

　　2.8  样品的含量测定取不同产地的黄芪药粉各0.2 g，精密称定，照“2.2”项下处理并测定。测定结果见表2。表2  不同产地不同生长年限黄芪药材中黄芪甲苷含量比较（略）

　　由表2可以看出，不同产地的黄芪药材生长年限对药材中黄芪甲苷含量的影响是不同的,生长年限对黄芪药材中黄芪甲苷含量的影响很有限，而产地对其影响则是主要的。由此说明，道地药材对于中药的质量多么重要。从总体看，山西应县和内蒙古固阳县下湿壕乡的黄芪药材中黄芪甲苷含量最高；2年生的黄芪药材中黄芪甲苷含量最高，5年生的最少。所以黄芪药材以2年生为宜，不用栽培5年再采集药用。

　　3  讨论

　　笔者对黄芪甲苷的提取方法和溶剂进行了考察。比较煎煮法，回流法，超声法提取3种方法，结果表明煎煮法提取含量最高，黄芪甲苷的荧光强度最强。同一提取方法，不同提取溶剂对黄芪甲苷的荧光强度有影响，颜色变化显著。采用超声法，分别用水，甲醇，正丁醇做提取溶剂，提取完毕后测定荧光强度，结果表明，水做提取溶剂时荧光强度最高，甲醇次之，正丁醇的荧光强度最低。由此可见，同一物质在不同溶剂中其荧光光谱的形状和强度都有差别，荧光波长随着溶剂极性的增强而长移，荧光强度也增强。
  
　　黄芪中的主要化学成分包括皂苷类，黄酮类及多糖类等，由于黄芪所含成分复杂，对样品纯化要求很高，用正丁醇提取液经5%碳酸氢钠洗涤，可除去大量含酚羟基的成分如黄酮和其他酚性干扰物质。有研究表明，采用KOH碱化，正丁醇提取，再用Na2HPO4溶液提取去杂质，也可使测定结果符合分析要求。《中国药典》2005版中黄芪药材的制备方法较繁琐且加入了氨试液，使黄芪甲苷的总量明显增加。分析原因，用氨试液处理样品的主要作用是将黄芪醇类皂苷酯氨解为黄芪甲苷，从而明显增加药材中黄芪甲苷含量［5］。此外，加同量的氨试液，不同的静置时间，黄芪甲苷的转化量也有差别。有研究表明，用氨试液处理，当pH≥11，静置时间为30 min时，药材中黄芪甲苷的含量最高［6］ 。由此可见，碱液类别不同，所起的作用也有差别，有待进一步研究。考虑到上述原因，本实验中未加入氨试液洗涤，测定的是黄芪药材中原有的黄芪甲苷含量，不包括任何转化的黄芪甲苷含量。

【参考文献】
  　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］. 北京：化学工业出版社，2005：212.

　　［2］林 琦，陆 阳，陈 泽. 黄芪属植物皂苷类成分研究进展［J］.国外医药·植物药分册，2002，17：143.

　　［3］钱广生，刘三康，李章万. HPLC测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量［J］ 华西药学杂志，2002，17（1）：41.

　　［4］刘养清，杜 鸣，徐秉久.大茴香酸-硫酸荧光体系测定黄芪甲苷［J］ 药学学报，2000，35（7）：544.

　　［5］田南卉，杨国红，方 颖，等 高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定黄芪和制剂中黄芪甲苷的含量［J］药物分析杂志，2000，20（3）：199.

　　［6］姜 勇，金 芳，鲍 忠，等.不同来源黄芪药材中黄芪甲苷的定量分析［J］ 中国中药杂志，2006，31（11）：930.