天麻头风灵胶囊的质量标准研究

　　2.2.3  空白干扰试验

　　照上述色谱条件,取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μL,分别注入色谱仪。供试品色谱图中,在与对照品色谱图相应的位置上,有一相同的色谱峰,而阴性对照溶液在此保留时间无色谱峰出现,故对供试品溶液含量测定无干扰,见图1。

　　2.2.4  标准曲线及线性范围 

　　取天麻素适量,精密称定,加50%甲醇制成300.8 μg/mL的标准贮备液,从中精密吸取0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mL分别稀释至10 mL,摇匀,分别吸取20 μL对照品溶液注入液相色谱仪测定。经回归分析,得回归方程： A=38 236C-3 498.9,相关系数r=0.999 9,线性范围6.016～96.256 μg/mL。

　　2.2.5  进样精密度试验 

　　取对照品溶液20 μL(24.064 μg/mL)注入液相色谱仪测定,连续6次,结果平均值A=914 106, RSD=0.09%。表明精密度较好。

　　2.2.6  稳定性试验 

　　取供试品溶液(批号040613),每隔2 h精密吸取20 μL注入液相色谱仪,测定样品12 h的稳定性。结果表明,供试品溶液在12 h内稳定,结果RSD=0.63%,表明被测物稳定。

　　2.2.7  重复性试验

　　 配制供试品溶液(批号040613)共5份,分别吸取20 μL溶液注入液相色谱仪测定,结果平均值为0.469 mg/g,RSD=0.84%,表明本法的重复性较好。

　　2.2.8  加样回收率试验 

　　取批号040613天麻头风灵分散片,研碎的粉末约0.25 g,精密称定,共6份,分别精密加入300.8 μg/mL天麻素对照品溶液0.32、0.32、0.4、0.4、0.48、0.48 mL,混匀后,分别加入50%甲醇9.68、9.68、9.6、9.6、9.52、9.52 mL,称定重量,超声处理30 min,放冷再称重,用50%甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。分别吸取20 μL溶液注入液相色谱仪测定,结果见表1。表1  加样回收率试验结果（略）

　　2.2.9  样品含量测定

　　分别精密吸取供试品溶液20 μL,注入液相色谱仪中进行测定,结果见表2。根据3批样品检验结果,标准中暂定为每片含天麻以天麻素(C13H18O7)计,不得少于0.20 mg。表2  样品含量测定结果（略）

　　3  讨论

　　3.1  检测波长的选择

    经对天麻素对照品进行紫外扫描,发现天麻素在270 nm和220 nm处有较大吸收,其中220 nm为最大吸收波长。当检测波长为270 nm时,杂质干扰较小；当检测波长为220 nm时,杂质干扰较大。但综合各种因素考虑决定选用220 nm为检测波长。

　　3.2  流动相的选择

    实验曾分别比较了不同比例的甲醇-水-磷酸流动相的色谱行为,考虑到色谱峰的对称性以及分析时间的合理性,选择甲醇-0.05%磷酸水(2.5∶97.5)为流动相,样品分离较佳。

　　3.3  样品预处理方法的选择

    实验考察了超声提取和加热回流提取两种提取方法,结果表明,超声提取效果更好；进一步对超声提取时间进行考察,发现超声处理30 min(工作频率40 kHz,超声功率250 W),样品天麻素已基本溶出。实验还比较了不同提取溶剂(甲醇、50%甲醇、流动相和亚沸蒸馏水)和不同提取次数对结果的影响,结果表明水和50%甲醇提取效果相当,结合色谱行为,选用甲醇提取；且超声一次就能达到含量测定要求。

【参考文献】
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　　[3] 申玉华,董文慧.双波长薄层扫描法测定天芎头痛宁胶囊中天麻素的含量[J].中药新药与临床药理,1995,6(3)：33－35.

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　　[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2000.78.