金耳菌丝体抗凝血有效部位初筛
【摘要】 目的 筛选金耳菌丝体抗凝血的有效部位。方法 采用系统溶剂法处理金耳菌丝发酵物,得乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水溶部位,通过凝血酶原实验、小鼠凝血实验及小鼠体内血栓形成实验等来筛选具有抗凝血作用的有效部位。结果 金耳菌丝体的正丁醇部位表现出较好的抗凝血作用,乙酸乙酯部位及水溶部位表现出微弱的活性。结论 金耳菌丝体抗凝血的有效部位为正丁醇提取部位。
【关键词】 金耳；菌丝体；抗凝血
Abstract：Objective To study the effective anticoagulant components of the fermented products of mycelium from Tremella aurantialba 9800. Method To adopt system menstruum deal with fermented products of mycelium from Tremella aurantialba, then mycelium from tremella aurantialba was studied with the clotting time of the thrombogen, the whole blood clotting time in mice and thrombosis experiment in mice. Result Butanol extract of fermented products of mycelium from Tremella aurantialba behave anticoagulant function. Ethyl acetate extract and water extract also behave feeble activity. Conclusion The effective anticoagulant components of the fermented products of mycelium from Tremella aurantialb is butanol extract.
Key words：Tremella aurantia；mycelium；anticoagulant
金耳(Tremella aurantia)又名黄金银耳、黄木耳、金木耳、黄耳、脑耳、胶耳等,是一种稀有野生名贵食、药用菌。分类地位属担子菌纲,银耳目,银耳科,银耳属,是银耳的近缘种,其生物学特性有许多相似之处,具有较高经济价值。据《中国药用真菌》记载,金耳性温中带寒,味甘,能化痰、止咳、定喘、调气、平肝肠,主治肺热、痰多、感冒咳嗽、气喘、高血压等。经对其进行深层发酵研究,发现菌丝发酵产物与原子实体相比无论成分与药用价值,前者均具有很大的应用价值[1]。刘氏等[2]以小白鼠血栓形成和大鼠脑脂质过氧化物等为指标,研究了金耳菌丝全发酵产物的抗凝血及抗血栓形成作用,对金耳菌丝发酵产物防治缺血性脑中风,治疗脑梗死、脑缺氧导致的肌力丧失、手足麻木、意识不清等症进行了初步的探索,但还需继续深入研究该产物的有效部位,进一步确定其物质基础及其药理作用机制。因此,我们采用系统溶剂法将金耳菌丝发酵产物分为若干提取部位,以几个提取部位为研究对象,通过抗凝及抗血栓形成等实验,深入探讨其抗凝血的有效部位。
1 实验材料
1.1 动物
昆明种小鼠,体重(22±0.89)g,雌雄各半；Wistar大鼠,体重(261±1.56)g,雌雄各半,均由中国医学科学院实验动物中心提供,合格证号(95)01-3008。
1.2 药物
金耳9800菌丝发酵物(简写为TM),采用山西省生物研究所自主分离驯化的金耳9800菌种发酵制得,批号20050511。
1.3 试剂与仪器
Dade Ci-Trol 1(德灵试剂),Dade Behring公司,批号060512；乌拉坦,上海化学试剂采购供应站经销,批号990309；羧甲基纤维素钠(CMC-Na),河北省蓝博化工厂生产,批号050816；其它化学试剂均为国产分析纯。CA-50自动血凝分析仪；旋转蒸发仪RE-52A(上海亚荣生化仪器厂)。
2 实验方法[2-6]
2.1 金耳菌丝体发酵物各部位的提取与分离
称取干燥菌丝体,分别用12倍量、10倍量70%的乙醇提取2次,每次2 h,过滤,滤液减压回收乙醇,以水混悬,用石油醚脱脂,后分别用乙酸乙脂、正丁醇萃取5次,减压回收乙酸乙酯、正丁醇,冻干,分别得乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位、水溶性部位,冷藏备用。用时以1%的CMC-Na溶液混悬成不同浓度供药理筛选。
2.2 各提取部位对凝血酶原作用的影响
乌拉坦(1.5 g/kg)麻醉大鼠,固定,分离腹主动脉取血(3.8%枸橼酸钠抗凝)。离心分离血浆。受试药物分别制成终浓度为100 mg/mL(高剂量组)、50 g/mL(低剂量组)的溶液。每管血浆0.045 mL,加入不同浓度的受试药物0.05 mL ,致凝剂(德灵试剂)0.10 mL,总体积为0.15 mL。于血凝分析仪上测定其凝血酶原时间,等量生理盐水作空白对照。记录凝血酶原时间。