HPLC法测定梅花点舌丹中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量

　　4.5  重复性试验

    精密称取本品约1.5 g,共6份,分别按“2.1”项下方法制备供试品溶液,于上述色谱条件下连续测定,分别计算华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量(n=6),RSD分别为2.38%和2.96%。

　　4.6  回收率试验
   
　　精密称取同一供试品,共6份,分别精密加入华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品,分别按“2.1”项下方法制备供试品溶液,于上述色谱条件下连续测定,计算各样品中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量,并计算回收率。结果见表1。表1  华蟾酥毒基、脂蟾毒配基回收率实验结果 （略）

　　4.7 样品含量测定
  
　　取本品各批约1.5 g,精密称定,分别按“2.1”项下同法操作制备供试品溶液,于上述色谱条件下连续测定,计算各样品中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量。结果见表2。表2  样品测定结果（略）

　　5  讨论

　　5.1  供试品溶液制备方法的选择
   
　　本品为中药复方制剂,组分复杂,经实验发现,样品的提取及前处理对华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定及各组分的分离影响较大,故对样品的提取及前处理条件进行了筛选。为确定用何种溶剂提取、溶剂的用量、超声处理的时间,我们参考2005年版《中国药典》(一部)梅花点舌丸、麝香保心丸及蟾酥药材等项下的含量测定方法[1],采用正交设计方法安排实验(见表3)。实验结果表明,提取液用甲醇,溶液剂量25 mL,超声处理30 min,可得到满意的结果。表3  三因素三水平正交试验（略）

　　5.2  吸收波长的选择

    取上述对照品溶液适量,用紫外可见分光光度计于200～800 nm波长处扫描,结果在296 nm处有最大吸收,参考有关文献及蟾酥药材的质量标准,决定采用296 nm作为检测波长。

　　5.3  流动相的选择
   
　　我们参考2005年版《中国药典》(一部)蟾酥的质量标准,以及成药中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定方法[1],比较了不同流动相配比,最终选择了乙腈-水(43.5∶56.5)为流动相。在该色谱系统条件下,可使华蟾酥毒基和脂蟾毒配基与其他组分良好分离。方法学研究结果表明,在选定的色谱条件下,其他组分不干扰华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定,系统适用性、方法重复性、精密度良好,回收率符合要求,测定结果准确。

【参考文献】
  [1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005. 593,368.