HPLC法测定陕西女贞子中齐墩果酸与熊果酸的含量

　　2.6  稳定性试验

    取同一供试品,按供试品溶液的制备方法操作,分别于0、1、2、4、8 h精密吸取20 μL进样,测得齐墩果酸、熊果酸峰面积的RSD分别为1.7%、2.3%。结果表明,供试品溶液在8 h内稳定性较好。

　　2.7  重复性试验

    精密称取同一样品10月样(№3)5份,按供试品溶液制备方法分别制备5份供试品溶液,测得齐墩果酸、熊果酸含量的RSD分别为0.64%、2.9%。

　　2.8  加样回收率试验

    取已知含量的供试品5份,分别精密加入一定量齐墩果酸与熊果酸对照品,照供试品溶液的制备方法进行处理,按上述测定方法进行测定,计算回收率。结果见表1。表1  加样回收率试验结果(略)

　　2.9  样品含量测定

    取不同产地、不同生长期的女贞子样品0.2 g,按2.3项下方法制成供试品溶液,在上述色谱条件下,每个样品重复测定5次,测量峰面积并用外标法计算样品中齐墩果酸与熊果酸的含量。对照品和样品的高效液相色谱图见图1,样品含量测定结果见表2、表3。表2  陕西境内不同产地女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含量（略）表3  西安产不同生长期女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含量（略）

　　3  讨论

　　3.1  空间环境对植物的影响(不同产地)

    由表2可见,陕西地区在同一时期安康产女贞子中的齐墩果酸和熊果酸的含量最高,这与当地的气候环境(气温、日照、土壤)等因素有关。女贞子属常绿植物,适宜生长在温暖潮湿的环境,陕北最冷月1月平均气温为-10～-4 ℃,故女贞子不适宜在陕北生长。本次研究未涉及陕北地区。

　　3.2  时间变化对植物的影响(不同生长期)

    通常认为女贞子在12月冬至前后果实紫黑色且饱满即为成熟,并大多在此时采收。由表3可见,不同生长期女贞子在10月份出现齐墩果酸含量最高值；而熊果酸在幼果中(8月)含量最高并随生长期延长逐渐下降。到12月时二者含量均降至最低。故中药材的采收应考虑其有效成分含量的动态变化,再结合其产率,以保证药物能发挥最大的疗效和节约资源。

　　3.3  流动相的选择

    齐墩果酸和熊果酸为五环三萜类同分异构体,在中性流动相中三萜酸可解离,很难分离。参考文献[2-3]实验中曾采用的甲醇-水(90∶10)、乙腈-水(80∶20)、乙腈-水-磷酸(75∶25∶0.02)、甲醇-0.5%醋酸铵溶液(90∶10)、乙腈-0.5%冰醋酸(75∶25)、乙腈-甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(50∶30∶20∶0.02∶0.04)等多种流动相,分离效果均不理想。其中选择冰醋酸峰形较平,故选用磷酸。通过加入适量磷酸和三乙胺调节流动相pH值,可抑制齐墩果酸和熊果酸的解离,改善色谱峰的峰形,且pH值对齐墩果酸和熊果酸的分离有较大影响。经过反复实验,最终选择乙腈-甲醇-水-磷酸-三乙胺(50∶30∶20∶0.02∶0.04)作为流动相,在此条件下,所得图谱基线平稳,齐墩果酸和熊果酸达到了较好的分离。

【参考文献】
  1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社, 2005.31.

　　[2] 石心红,郭江宁,翟静华.HPLC法测定女贞子中齐墩果酸、熊果酸的含量[J].海峡药学,2005,17(4)：41.

　　[3] 李 涛,郝武常,徐长根,等.HPLC-ELSD法测定不同产地女贞子中齐墩果酸与熊果酸的含量[J].中药材,2005,28(5)：391.