HPLC-ELSD法测定耳聋左慈丸中熊果酸的含量

【摘要】  目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定耳聋左慈丸中熊果酸的含量。方法 色谱柱VP-ODS C18；以甲醇-0.5%醋酸(90∶10)为流动相；流速：0.8 mL/min。结果 熊果酸在63～630 μg/mL范围内呈良好线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为98.11%(RSD=1.14%)。结论 本法简便、准确、重现性好,可用于该制剂的含量测定。

【关键词】  耳聋左慈丸；熊果酸；高效液相色谱-蒸发光散射检测法

    Abstract：Objective The method for determination of ursolic acid in Erlongzuoci pills by HPLC-ELSD was established. Methods VP-ODS C18 column was used with the mobile phase of methanol-0.5% acetic acid (90∶10). The flow rate was 0.8 mL/min. Results Ursolic acid showed a good linear relationship at the range of 63～630 μg/mL (r=0.999 9). The average recovery was 98.11% (RSD=1.14%). Conclusions The method is simple, accurate and reproducible. It can be used for determination of ursolic acid in Erlongzuoci pills.
   
　　Key words：Erlongzuoci pills；Ursolic acid；HPLC-ELSD
　　
　　耳聋左慈丸原标准来源于2005年版《中华人民共和国药典》(一部),由磁石、熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药等组成,具有滋肾平肝的作用,用于肝肾阴虚、耳鸣耳聋、头晕目眩的治疗。原标准[1]中采用薄层扫描法测定山茱萸中熊果酸的含量,但薄层扫描法存在操作繁琐、受实验条件影响较大、重现性差等不足。我们建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC- ELSD)测定制剂中熊果酸的含量,结果表明,该法简便易行,重现性好,回收率高,可用于耳聋左慈丸的质量控制。

　　1  仪器与试药
   
　　岛津LC-10AT高效液相色谱仪,Alltech2000型ELSD检测器(美国奥泰科技有限公司)。流速：0.8 mL/min,漂移管温度：80 ℃,气体流速：2.2 mL/min,柱温：30 ℃。
   
　　耳聋左慈丸为自制；熊果酸对照品购于中国药品生物制品检定所(批号110742-200415)。甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件[2]

    色谱柱：VP-ODS C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-0.5%醋酸(90∶10)；流速：0.8 mL/min；理论塔板数按熊果酸计算应不低于2 000。

　　2.2  对照品溶液的制备

    精密称取在60 ℃减压干燥4 h的熊果酸对照品适量,加甲醇分别制成1 mL含250 μg和350 μg的溶液,即得。

　　2.3  供试品溶液的制备

    取本品15 g研细,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇100 mL,称定重量,超声处理40 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液50 mL,置水浴上蒸干,加石油醚浸泡2次,每次2 min,倾去石油醚液,残渣加甲醇溶解,转移至10 mL量瓶中并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

　　2.4  阴性溶液的制备

    按处方比例称取除山茱萸外的其它药材,按耳聋左慈丸的制备工艺及供试品溶液的制备方法制备阴性溶液。

　　2.5  空白试验 

    取对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液,依上述色谱条件测定,结果表明阴性无干扰(见图1)。

　　2.6  线性关系的考察

    精密称取熊果酸对照品15.75 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇超声溶解并稀释至刻度,精密吸取1、2、4、8、10 mL,置10 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,分别吸取20 μL,照高效液相色谱法测定峰面积,以浓度对数(lgc)为横坐标,峰面积对数(lgs)为纵坐标进行回归处理,回归方程为：lgs=1.375 2 lgc＋3.209 6(r=0.999 9)。结果表明,熊果酸在63～630 μg/mL范围内具有良好的线性关系。