抗感冒颗粒的薄层色谱和含量测定研究

　　3  含量测定
  
　　本方中黄芩用量较大,且其中含有的黄芩苷化学性质稳定,测定方法简便,故在含量测定时选择黄芩苷为指标[4]。

　　3.1  色谱条件

    AichromBond-AQ-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2),流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：280 nm；进样量：10 μL。

　　3.2  对照品溶液的制备

    精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的黄芩苷对照品,加甲醇制成每1 mL含0.496 mg的溶液,摇匀,作为母液。从中吸取5 mL,用甲醇稀释至50 mL,制成每毫升含0.049 6 mg黄芩苷溶液,备用。

　　3.3  供试品溶液的制备
   
　　取10个批号的抗感冒颗粒,每批取2份,研细,每份各取0.2 g,精密称定,置具塞三角烧瓶中,精密加入甲醇10 mL,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

　　3.4  系统适应性考察
   
　　分别精密吸取黄芩苷对照液和各供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪。理论塔板数以黄芩苷峰计,不低于2 500,此时,黄芩苷峰与其它相邻峰基线分离,分离度R>1.5,保留时间约为14 min。色谱图见图1。

　　3.5  线性关系的考察

    分别精密吸取浓度为0.049 6 mg/mL黄芩苷对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0 mL定容至10 mL量瓶中,摇匀,制成4.96、9.92、14.88、19.84、29.76 μg/mL的系列溶液。
   
　　精密吸取5个不同浓度的对照液各10 μL,注入液相色谱仪,各进2针。以浓度C为横坐标,以黄芩苷平均峰面积Y为纵坐标进行线性回归,得回归方程：C＝2×10-4A＋0.787 9,r＝0.999 7,线性范围为0.049 6～0.297 6 μg。

　　3.6  精密度试验

    精密吸取浓度为9.92 μg/mL对照品溶液10 μL,连续进样5次,测得黄芩苷峰面积值RSD＝2.48%。

　　3.7  稳定性试验

    精密吸取批号为050705的第一个供试液10 μL,每间隔2 h进一针,连续考察10 h,结果黄芩苷峰面积值的RSD＝2.76%,表明在10 h内基本稳定。

　　3.8  专属性试验

    在与样品测定完全相同的条件下,精密吸取黄芩阴性对照液10 μL,注入液相色谱仪,连续进3针,阴性无干扰。说明在抗感冒颗粒中,黄芩苷的专属性较强。

　　3.9  重复性试验

    取同一批号(050705)样品0.25 g,共6份,精密称定,按样品测定项下的方法测定,测得样品中指标成分黄芩苷的含量,RSD＝2.12%,结果表明重复性良好。

　　3.10  加样回收率试验

    取批号为050705的抗感冒颗粒0.25 g,精密称定6份,各精密加入浓度为29.76 μg/mL的黄芩苷对照液2.5 mL,分别用与“3.3”项下相同的方法制得供试液。并用与“3.11”项下相同的方法测得样品中指标成分黄芩苷的含量,结果见表1。表1  加样回收率试验结果（略）

　　3.11  样品测定
   
　　精密吸取各供试液10 μL,注入液相色谱仪,分别进2针。采用标准曲线法定量,根据取样量和稀释度,计算含量,结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）

    由实验结果可知,仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重现性和加样回收率等均较好,符合定量要求。根据以上测定结果,暂定每1 g抗感冒颗粒中含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计,不得少于0.49 mg。

　　4  讨论

    上述实验中,黄芩、甘草、桔梗的鉴别专属性强,重现性好,操作简便,故正式纳入抗感冒颗粒质量标准中；而荆芥、板蓝根的鉴别,因阴性有干扰,专属性不强,故未纳入质量标准中。

【参考文献】
  　　[1] 曾元儿,卢文彪,钟镜金.复方黄芩片质量标准的研究[J].中药新药与临床药理,2003,14(4)：260－262.

　　[2] 肖崇厚,杨松松,洪筱坤.中药化学[M].上海：上海科学技术出版社, 1997.548－510.

　　[3] 梁生旺.中药制剂分析[M].北京：中国中医药出版社,2003.142－143.

　　[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.211.