高效液相色谱法测定小蓟中芦丁含量

【摘要】  目的 采用高效液相色谱法对小蓟中芦丁成分进行定量。方法 采用Lichrospher C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,
5 μm),柱温30 ℃,甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm。结果 小蓟中芦丁的含量为0.580 8 mg/g。结论 经过系统的方法学考察,该方法具有简便、专属、稳定、可重复的特点,可用于小蓟中芦丁的含量测定。

【关键词】  小蓟；芦丁；含量测定；高效液相色谱法

     Abstract：Objective  HPLC was used to establish a method for determination of rutin in herba crisii. Methods Lichrospher C18 column (4.6 mm×200 mm, 5 μm) was used with methoanol-acetic acid (35∶65) as mobile phase, flow rate being 1.0 mL/min, column temperature at 30 ℃, detection wavelength at 254 nm. Results The content of rutin in herba crisii was 0.580 8 mg/g. Conclusions The method is proved to be simple, rapid, and accurate. It can be applied to content determination of rutin in herba crisii.

    Key words：Cirsium setosum (Willd.) MB.；rutin；content determination；HPLC
　　
　　小蓟为菊科植物小蓟[Cirsium setosum(Willd.)MB.]的干燥地上部分或根,具有凉血止血、祛瘀消肿的功能,可用于治疗衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外伤出血、痈肿疮毒等。小蓟中所含有机酸中有芦丁、咖啡酸等,文献记载芦丁、咖啡酸为其止血活性成分。本实验采用高效液相色谱法测定小蓟中芦丁的含量,方法稳定、快速、重现性好。

　　1  实验材料

　　1.1  仪器

    LC-10AT高效液相色谱仪,SPD-10A检测器,CLASS-LC10色谱工作站；sartorius BP211D电子天平；SHIMADZU AY220电子天平；KQ-500型超声波清洗器。

　　1.2  试剂与药物
   
　　甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。芦丁购自中国药品生物制品检定所(批号0080-9705)。小蓟药材分别购自江苏(南京医药股份有限公司,批号020313)、安徽(安徽省亳州市永刚饮片有限公司,批号031205)、上海(上海华宇药业有限公司,批号040802),经本院药用鉴定教研室陈建伟教授鉴定为小蓟正品[Cirsium setosum(Willd.)MB.]。

　　1.3  色谱条件及系统适用性试验

　　1.3.1  色谱条件的选择 

　　色谱柱：Lichrospher C18(4.6 mm×200 mm,5 μm),柱温30 ℃,流动相：甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65),流速1.0 mL/min；检测波长：254 nm。对照品、样品的高效液相色谱图见图1。

　　1.3.2  提取溶剂的考察
 
　　取本品2份,各1.0 g,精密称定,置2个50 mL具塞锥形瓶中,分别加入50 mL甲醇和50 mL 40%甲醇,称重,浸置1 h,超声处理(功率500 W,频率50 kHz)40 min,补足称重,滤过；微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。分别吸取上述2份溶液各10 μL,注入高效液相色谱仪,按外标法以峰面积计算。结果表明,以体积分数为40%甲醇为提取溶剂效果较好。

　　2  方法与结果

　　2.1  溶液制备

　　2.1.1  对照品溶液的制备 

　　精密称取芦丁对照品0.98 mg,置25 mL容量瓶中,加40%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。