HPLC法测定祖卡木颗粒中大黄素和大黄酚的含量

　　2.3  供试品溶液的制备

    取本品颗粒适量,研细,精密称取1.0 g,置100 mL圆底烧瓶中,加2.5 moL/L硫酸溶液20 mL,超声处理5 min,再加氯仿20 mL,加热回流60 min,冷却,移置分液漏斗中,用少量氯仿洗涤容器,并入分液漏斗中,分取氯仿层,酸液用氯仿提取2次,每次约10 mL,合并氯仿液,移至蒸发皿中,水浴蒸干,残渣加甲醇微热使溶解,放冷后,移至25 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,使用前过0.45 μm微孔滤膜,弃去初滤液,取续滤液,即得供试品溶液。

　　2.4  线性关系的考察

    分别吸取大黄素贮备液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,从中分别取10 μL注入液相色谱仪,测定。以进样浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行回归,得标准曲线方程为：A=41 711C-1 615.9,r=0.999 4。大黄素在0.4～4 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

    精密吸取大黄酚贮备液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0 mL,分别置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,从中分别取10 μL注入液相色谱仪,测定。以进样浓度为横坐标,峰面积为纵坐标进行回归,得标准曲线方程为：A=58 968C-5 672.3,r=0.999 2。结果大黄酚在0.848～8.48 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

　　2.5  阴性试验

    按样品工艺制备缺大黄的阴性对照品,按供试品溶液的制备方法操作,进样10 μL,结果HPLC 图谱在与大黄素和大黄酚相应位置上没有吸收峰,表明其他成分对大黄素和大黄酚测定无干扰(见图1)。

　　2.6  精密度试验

    精密量取同一供试品(批号031007),照供试品溶液方法制备,重复进样5次,每次进样10 μL,求得大黄素RSD=1.94%,大黄酚RSD=2.46%。

　　2.7  重现性试验

    取同一批号(批号031007)样品5份进样测定,求得大黄素RSD=1.51%,大黄酚RSD=1.39%。

　　2.8  稳定性试验

    同一批样品(批号031007)分别在同一天的不同时间(每隔2 h)用含量测定方法重复测定5次,计算大黄素和大黄酚总量的RSD=1.16%；同一批样品(批号031007)分别在不同天(连续5 d)用含量测定方法重复测定,计算大黄素和大黄酚总量的RSD=1.98%。

　　2.9  回收率试验

    采用标准添加法测定回收率。精密称取供试品(批号031007)0.5 g,共7份,分别置具塞锥形瓶中,第1、2份作为空白回收,其余5份分别加入浓度为35.0 μg/mL的大黄素对照品溶液1.0 mL,再分别加入浓度为115.0 μg/mL的大黄酚对照品溶液1.0 mL,照2.3项下方法制备,并进样10 μL测定含量。结果大黄素平均回收率为95.43%,RSD=1.42%；大黄酚平均回收率为95.80%,RSD=1.40%。

　　2.10  最小检测限测定及定量限测定

    配制浓度适当的大黄素对照品溶液,进样10 μL,当信噪比S/N为3时,其最小检测浓度约为50 ng/mL。

　　3  结论
   
　　本品为复方制剂,药味复杂,笔者结合该样品的特点对供试品的提取条件进行了考察,结果超声5 min、氯仿回流提取1 h含量最高。2000年版《中华人民共和国药典》(一部)“大黄”[含量测定]项下收载了大黄素和大黄酚的含量测定方法,并规定大黄中含大黄素和大黄酚的总量不得少于0.5%,本测定结果符合其规定[1]。大黄素和大黄酚的含量测定方法阴性对照无干扰,经方法学考察,稳定可行,重现性好,可作为该制剂的质量控制指标。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2000.18.

　　[2] 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准(维吾尔药分册)[S].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社,1999.111.