止痛化癥分散片质量标准研究

　　3.5  线性关系
   
　　精密称取丹参素钠(以丹参素计)对照品30 mg,置10 mL量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度,摇匀,再分别精密量取上述溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL,置10 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液各20 μL,分别注入液相色谱仪,测定峰面积。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标进行回归,得回归方程Y＝289.29X＋648.26,r＝0.999 8。结果表明,丹参素进样量在3.6～8.4 μg范围内线性关系良好。

　　3.6  最低检测限

 　   取线性关系试验项下的3号溶液1 mL,置50 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,再精密量取20 μL注入液相色谱仪中,记录色谱图,按3倍信噪比S/N计,最低检测限为100 ng。

　　3.7  定量限

 　   取线性关系试验项下的3号溶液3 mL,置50 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取20 μL,注入液相色谱仪, 记录色谱图。色谱图中,信噪比约为10∶1,计算定量限约为300 ng。

　　3.8  稳定性试验

　    精密吸取供试品溶液20 μL,每隔2 h进样测定1次,共测定8 h,结果表明,RSD＝2.1%,表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

　　3.9  精密度试验

  　  精密吸取对照品溶液20 μL,连续进样5次,结果其峰面积的RSD＝1.28%,表明仪器有很好的精密度。

　　3.10  重现性试验 

  　  照“3.2”项下制备6份供试品溶液,分别精密吸取20 μL,按前述色谱条件进样分析,测定色谱峰面积,结果RSD＝1.12%,表明本法重现性良好。

　　3.11  回收率试验
   
　　采用加样回收法。精密称取已知丹参素含量的供试品药粉,按“3.2”项下方法制备供试品溶液,再添加一定量的丹参素钠对照品溶液,按上述色谱条件测定。结果平均回收率为99.66%, RSD＝1.60%。见表1。表1  加样回收试验测定结果（略）

　　3.12  样品测定

   　 为制定含量限度,制备供试品3批(20060310、20060311、20060312)。按上述测定方法,测定其中丹参素的含量,结果见表2。表2  丹参素含量测定结果（略）
   
　　根据上述测定结果,并参照止痛化癥胶囊[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)][1],本品每片含丹参以丹参素(C15H24N2O)计,不得少于0.2 mg。
 
　　4  讨论

    　本试验采用TLC法对方中当归的鉴别方法加以筛选研究,但阴性对照有干扰,无法确立重复性、专属性良好的分析方法,其鉴别方法有待于进一步研究。在选定色谱条件下,本试验以HPLC法测定臣药当归中阿魏酸的含量,供试溶液中阿魏酸与相邻组分分离度良好,阴性液无干扰。但在方法学考察中,回收率低于新药申报的要求,约在85%～90%之间,还有待于进一步研究。
   
　　2005年版《中华人民共和国药典》规定了丹参中丹参酮ⅡA的含量测定方法与限度,经查阅有关文献,丹参中所含水溶性成分如丹参素、原儿茶醛相对丹参酮ⅡA稳定,近几年文献报道均为测定复方制剂中(丹参)丹参素含量,且丹参中水溶性成分丹参素为活血的有效成分之一,故本试验拟用HPLC法测定君药丹参中丹参素的含量。在选定的色谱条件下,供试溶液中丹参素与相邻组分分离度良好,阴性液无干扰。经方法学考察,方法的重复性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定。因此,确立本制剂定量指标为丹参素,定量方法为HPLC法。试验中对提取溶剂、超声处理条件进行了考察,结果表明,选用1%盐酸-甲醇(50∶50)为提取溶剂,超声提取30 min,样品中丹参素提取效率最佳。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.372,104,94,29.

　　[2] 丁水平,杜 光.高效液相色谱法测定妇血康胶囊中原儿茶酸的含量[J].中国医院药学杂志,2006,36(9)：1177－1179.

　　[3] 陈 斌,余岳林,张少敏,等.HPLC法测定止痛化癥胶囊中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸和丹酚酸B含量[J].药学服务与研究,2007,7(1)：71－73.