葛黄活血胶囊质量控制标准研究

                     作者：张裕强　朱华旭　郭立玮

【摘要】  ：目的 建立葛黄活血胶囊的质量控制标准。方法 建立黄芪、秦艽的薄层色谱鉴别方法和葛根素含量的高效液相色谱测定方法。结果 定性方法能检出黄芪和秦艽,且阴性对照无干扰；葛根素在0.020 79～0.665 2 mg/mL之间呈良好的线性关系,r＝1.000 0,平均加样回收率为100.1%,RSD＝0.92%。结论 该法操作简便、结果准确、重现性好,适用于葛黄活血胶囊的质量控制标准。

【关键词】  葛黄活血胶囊　薄层色谱法　高效液相色谱法　葛根素

   　 Abstract：Objective To establish the quality control standards of Gehuang Huoxue Capsules. Methods TLC methods for identification of Radix Astragali and Radix Gentianae Macrophyllae were established. A simple HPLC method was established for the determination of Puerarin. Results The spots on TLC plates were clear without interference in the blank reference. The liner range of Puerarin was 0.020 79～0.665 2 mg/mL, r＝1.000 0. The average recovery of Puerarin was 100.1% and RSD＝0.92%. Conclusion The method is simple, accurate, reproducible and can be used for the quality control standards of Gehuang Huoxue Capsules.

  　  Key words：Gehuang Huoxue Capsules；TLC；HPLC；Puerarin

   　 葛黄活血胶囊由葛根、黄芪、当归、秦艽、丹参等8味中药组成,具有活血化瘀、理气止痛、疏通经络、调和经脉之功效。用于治疗头痛眩晕、肢体麻木、心绞痛、高血压、高血脂等症。该方处于研制过程中。为了更好地控制其质量,保证该品的临床疗效,本研究采用薄层色谱法对方中黄芪、秦艽进行定性鉴别,采用高效液相色谱法对方中君药葛根进行定量研究。葛根具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻的功效,葛根素的含量较高,是葛根的主要有效成分。葛根素具有扩张冠脉、降血脂、抗血栓形成、调节血糖、改善脑微循环系统等作用,与本品的功能主治相一致,故将葛根素定为本品含量测定的指标性成分。文献报道的葛根素含量测定方法有高效液相色谱法[1]、分光光度法[2]等。本研究建立了本品制剂中葛根素的高效液相色谱测定法,方法可靠、灵敏、快速。

　　1  仪器与试药

    　采用美国Agilent 1100 HPLC系统,DAD检测器,自动进样器,Agilent色谱工作站。色谱柱：Kromasil C18反相色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),中国科学院大连化学物理研究所制。
   
　　药材购于安徽省亳州市药材公司,经南京中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定。秦艽为龙胆科植物秦艽Gentiana macrophylla Pall.、麻黄秦艽Gentiana straminea Maxim.、粗径秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk. 或小秦艽Gentiana dahurica fisch.的干燥根,葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.) Ohwi的干燥根。
   
　　葛根素对照品购自中国药品生物制品检定所,批号110752-
200209,供含量测定用。甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司),水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯,硅胶G(青岛海洋化工有限公司)。葛黄活血胶囊(批号060817、060818、060819)由南京中医药大学中医药研究院提供。

　　2  定性鉴别

　　2.1  黄芪的薄层色谱鉴别[3]
   
　　取本品6粒,倾出内容物,研细,加水饱和的正丁醇120 mL,超声提取30 min,滤过,滤液用0.5%氢氧化钠溶液洗涤3次,每次50 mL,弃去下层碱液,上层正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤至中性,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇2 mL溶解,作为供试品溶液。黄芪阴性制剂采用与制剂相同的处理方法。取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述3种溶液各30、30、15 μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,日光下显相同的棕褐色斑点,紫外光灯(365 nm)下显相同的橙黄色荧光斑点,阴性在相同位置无此斑点存在。

　　2.2  秦艽的薄层色谱鉴别[4]
   
　　取本品6粒,倾出内容物,加适量浓氨水试液使之润湿,再加三氯甲烷40 mL,超声提取30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷2 mL溶解,作为供试品溶液。取秦艽药材粉末3 g,加水80 mL,加热回流30 min,弃去水液,药渣加适量浓氨水试液使之润湿,再加三氯甲烷25 mL,超声提取30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷5 mL溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述2种溶液各7、3 μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-甲醇(4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的绿色荧光斑点,阴性在相同位置无此斑点存在。

　　3  含量测定

　　3.1  色谱条件[5]
   
　　色谱柱：Kromasil C18反相柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸水(20∶80)；检测波长：250 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；灵敏度：0.5 AUFS；理论塔板数均在3 000以上。依照上述色谱条件测定,葛根素与其它组分均能达到基线分离。

　　3.2  对照品溶液的制备
   
　　精密称取于60 ℃干燥至恒重的葛根素对照品16.63 mg,置于25 mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,配成0.665 2 mg/mL的溶液,作为对照品溶液。

　　3.3  供试品溶液的制备
   
　　取本品装量差异项下的内容物,研细,取约0.25 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加30%乙醇25 mL,称定重量,超声处理(50 kHz,250 W)10 min,放冷,称重,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液作为供试品溶液。

　　3.4  空白试验
   
　　原方去葛根药材,按制剂工艺法进行制备,得缺葛根的阴性制剂。取阴性制剂内容物0.25 g,按制剂供试液的制备方法制备阴性制剂供试液,依法分析,阴性制剂色谱图在葛根素相应保留时间位置无干扰峰,结果见图1。