止痢宁片质量控制方法研究　

　　
　　3.4  阴性试验
   
　　制备缺少穿心莲提取物的止痢宁片阴性样品,按“3.3”项下方法操作制备阴性样品溶液。在“3.1”所述色谱条件下,对照品、样品及穿心莲阴性样品的色谱图见图1。结果表明,在该条件下,脱水穿心莲内酯的出峰区阴性样品无干扰峰。

　　3.5  线性关系考察
   
　　精密吸取脱水穿心莲内酯标准品溶液10 mL,用水稀释1倍(62 μg/mL),分别进样1、2.5、5、10、15、20、25 μL,依前法测定。以脱水穿心莲内酯的量(μg)为横坐标,峰面积值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程Y＝1 359.5X＋0.315 4,相关系数r＝1.000 0。表明脱水穿心莲内酯在0.062～1.55 μg范围内进样量与峰面积值有较好的线性关系。

　　3.6  精密度试验

    　精密吸取“3.5”项所述对照品溶液10 μL,重复进样6次,结果峰面积值的RSD＝0.20%。

　　3.7  稳定性试验

    　按“3.3”项下方法制备溶液,分别在0、2.5、5、7、9.5、11.5 h进样,分别测定,记录峰面积积分值。结果表明,脱水穿心莲内酯峰面积在11.5 h内基本不变,RSD＝0.33%。

　　3.8  重复性试验

 　   取同一批样品(批号20060601)5份,各约1 g,精密称定,分别按“3.3”项下方法操作,进行测定。结果脱水穿心莲内酯的平均含量为7.46 mg/g,RSD＝0.41%。

　　3.9  回收率试验
   
　　分别取已知含量的样品(批号20060601)5份,各约0.5 g,精密称定,分别精密添加脱水穿心莲内酯对照品3.71 mg,按“3.3”项下方法处理,按上述条件进行测定,结果见表1。表1  回收率试验结果（略）

　　3.10  样品测定
   
　　取止痢宁片3批,分别按“3.3”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进样测定,外标法定量,结果见表2。表2  止痢宁片含量测定结果(略)

　　4  讨论
   
　　在建立木香薄层色谱鉴别方法的过程中,曾参考药典方法,直接采用硅胶G薄层板进行层析,结果木香中的2个特征成分木香烃内酯、去氢木香内酯的Rf值小,两者分离度也较差。通过实验摸索,并结合成分结构特征,我们采用了络合薄层层析的方法,即用2.5%硝酸银溶液铺制薄层板进行层析[2],使两者得到了很好的分离,且重现性好。

   　 在含量测定方法中,我们对供试品溶液制备的关键步骤进行了考察：①供试品超声时间的选择：对不同超声时间的样品回收率,以及药渣中脱水穿心莲内酯的含量进行了比较,确定超声30 min最佳。②最佳洗脱体积的选择：分别对10、15 mL甲醇洗脱后的柱子继续洗脱,检测其中的脱水穿心莲内酯,结果15 mL甲醇洗脱后没有检测出脱水穿心莲内酯,认为最佳洗脱体积为15 mL。

  　  采用本试验供试品溶液制备方法,结果脱水穿心莲内酯提取效率高,样品的回收率较为满意,而且操作简单、灵敏、重现性好,可以用来对止痢宁片中脱水穿心莲内酯的含量进行测定。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.附录ⅥD,190.

　　[2] 王战国,赖先荣,肖莹莹,等.川木香质量标准研究[J].成都中医药大学学报,2006,29(1)：54－56.