HPLC法测定不同产地刺五加叶中绿原酸和金丝桃苷含量

　　2.7  重复性试验

    取同一产地刺五加叶(凤城)粗粉5份,每份约0.5 g,精密称定,照“2.3”项下方法制备供试品溶液,依法进行测定。结果绿原酸平均质量分数为3.79%,RSD＝1.93%；金丝桃苷为0.531%,RSD＝1.12%,表明本测定方法的重复性良好。

　　2.8  回收率试验

    精密称取同一产地已知含量的刺五加叶(凤城)粗粉6份,每份约0.25 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入含绿原酸4.8 mg/mL、金丝桃苷0.7 mg/mL的混合对照品溶液2 mL,制备供试品溶液,按上述高效液相色谱条件测定,计算。结果绿原酸和金丝桃苷的平均回收率分别为97.14%和98.21%,RSD分别为2.65%和1.89%。

　　2.9  样品测定

    分别精密称取8个产地刺五加叶粗粉各0.5 g,按上述方法测定,测定结果见表1。所测样品绿原酸含量为0.207%～4.600%,平均2.551%(n＝8)；金丝桃苷含量为0.206%～0.780%,平均0.499%(n＝8)。其中采自丹东刺五加基地的样品所含绿原酸及金丝桃苷均较高。表1  不同产地刺五加叶中绿原酸和金丝桃苷含量测定结果（略）
 
　　3  讨论

　　3.1  流动相的优化

    比较了不同系统和流动相比例,如乙腈(A)-0.1%磷酸(B)梯度洗脱(0～50 min,A的体积分数为10%～20%；50～86 min,A的体积分数为20%～48%；86～135 min,A的体积分数为48%～100%)[1]、甲醇-0.4%磷酸(38∶62)[2]、磷酸溶液的比例经调试磷酸溶液(13∶87)[3],效果均不够理想。结果甲醇-0.4%磷酸(17∶83)系统绿原酸和金丝桃苷得到较好分离,且保留时间合适。

　　3.2  检测波长的选择

    文献报道绿原酸在327 nm处有最大吸收[2],金丝桃苷在257 nm和360 nm波长处有最大吸收[4]。通过试验比较,在360 nm处绿原酸和金丝桃苷的峰面积值较理想,故选择360 nm为2个成分的同一检测波长。

　　3.3  供试品提取条件的考察

　　3.3.1  溶剂的选择 

　　有文献报道,采用甲醇超声法提取刺五加叶中绿原酸和金丝桃苷[5-6],笔者取供试品(凤城)适量,分别采用水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇及25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇、100%甲醇为提取溶剂进行超声处理,结果以50%乙醇超声时绿原酸和金丝桃苷的提取率均为最高,质量分数分别为3.220%和0.486%；而甲醇超声仅为0.851%和0.351%。

　　3.3.2  提取时间的选择 

　　以50%乙醇作为提取溶剂,按15、30、45 min不同时间超声处理,药材中绿原酸和金丝桃苷质量分数分别为3.48%、3.83%、3.77%和0.45%、0.54%、0.49%,结果表明超声30 min即能提取完全。

　　3.3.3  溶剂用量的选择 

　　分别采用10、20、50 mL的50%乙醇超声30 min提取,结果表明,溶剂用量为20 mL与50 mL时测得的绿原酸和金丝桃苷的量相差不大,因此选用20 mL提取。

　　3.4  含量比较

    采自丹东刺五加基地的样品中绿原酸含量最高,同时含有较高量的金丝桃苷,整体质量优于其他产地。南京地区刺五加叶中金丝桃苷含量略高于东北地区,金丝桃苷含量是否与气候有关有待进一步研究。

【参考文献】
  　　[1] 杨 芳,许重远,李亦蕾,等.RP-HPLC法测定宁心红杞胶囊中金丝桃苷和绿原酸的含量[J].中国药房,2008,19(9)：694－696.

　　[2] 苏来曼·哈力克,凯赛尔·阿不拉,敏 德.RP-HPLC测定不同产地不同采集期天山雪莲中绿原酸和芦丁[J].中草药,2007,38(9)：1412－1414.

　　[3] 向增旭,郭巧生.不同产地金银花的绿原酸含量比较[J].中药材,2007, 30(12)：1497－1498.

　　[4] 赵艳普.HPLC测定照山白浸膏片中金丝桃苷的含量[J].中成药,2008, 30(3)：456－457.

　　[5] 郑春英,刘松梅,李宏涛,等.胶束电动毛细管电泳同时检测刺五加中紫丁香苷及绿原酸的含量[J].中国药学杂志,2007,42(16)：1248－1251.

　　[6] 郑春英,刘松梅,李宏涛,等.毛细管电泳法同时检测刺五加叶中的芦丁和金丝桃苷含量[J].中国药学杂志,2008,43(10)：783－800.