白花丹血清指纹图谱的初步研究

　　2.2.2  白花丹供试液的制备 

　　取适量按上述方法制备的白花丹醇提取物(干浸膏),用甲醇配置成含药量0.1 g/mL,过0.45 μm滤膜,供高效液相色谱(HPLC)分析用。

　　2.2.3  血清样品的采集和处理 

　　SD大鼠随机分为给药组和空白组,每组5只。给药组以药液量15 mL/kg灌胃,空白组给予同体积的蒸馏水,每日1次,连续3 d。末次给药后1 h,腹腔注射20%乌拉坦(l mL/100 g),麻醉后,从腹主动脉取血约5 mL,置于5 mL具塞离心管中,静置30 min后,3 000 r/min离心10 min。用微量移液器吸取同组血清于5 mL具塞离心管中,置于-20 ℃下冷冻保存。行HPLC分析前,用微量移液器吸取血清0.4 mL于2 mL具塞离心管中,加甲醇1.6 mL,充分振摇后,3 000 r/min离心15 min,上清液过0.45 μm滤膜,供HPLC分析用。

　　2.2.4  高效液相色谱分析 

　　按液相色谱条件,分别测定白花丹供试液、大鼠含药血清和空白血清。

　　3  结果

    由图1可见,白花丹醇提物共分离得到9个色谱峰,其中峰面积最大的是7号峰。与空白血清比较,白花丹含药血清出现了1个新色谱峰,即11号峰。比较图1(a,b,c)可知,白花丹含药血清的11号峰与白花丹供试液的7号峰对应,说明有1个白花丹的原型成分吸收入血。而在图1(b,c)中的10号峰与12号峰相对应,是血清中的固有成分。

　　4  讨论

    笔者分别采用不同醇浓度提取制备白花丹供试液。通过比较发现,90%乙醇对提取白花丹中的化学成分有较好的分离效果。因此,采用90%醇提取法制备白花丹供试液。同时,对供试液的稳定性、仪器的精密度和测定方法的重复性进行了考察,均符合相关要求。

　　试验中分别采用甲醇沉淀法、热水浴法及高氯酸钾沉淀法对血清样品进行处理,从对待测组分的影响、干扰情况及对色谱分析条件的影响等方面进行考察,确定采用甲醇沉淀法处理血清样品。

    在白花丹醇提物和含药血清色谱图中,7号峰与11号峰位置相对应,可以确定该色谱峰是白花丹入血成分,有可能成为白花丹体内直接作用物质,有待采用质谱检测等方法做进一步考察。

【参考文献】
  　[1] 宋立人,洪 恂,丁旭亮,等.现代中药学大辞典(上册)[M].北京：人民卫生出版社,2001.283.

　　[2] 刘 圆,钟 熠,高泽文,等.白花丹药材的研究进展[J].华西药学杂志, 2006,21(1)：71.