HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素的含量

　　2.5  精密度试验

    取槲皮素对照品溶液,各重复进样6次,测定峰面积,结果槲皮素峰面积RSD＝0.58%。

　　2.6  重复性试验

    取同一批的样品6份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定鹿蹄草中槲皮素含量,结果RSD＝0.82%。

　　2.7  稳定性试验

    取同一供试品溶液,分别于配制后0、4、8、12 h依法测定峰面积,结果RSD＝0.56%,表明样品溶液在12 h内基本稳定。

　　2.8  加样回收率试验
   
　　取已知槲皮素含量的鹿蹄草粉末,取约0.5 g,分别精密称定,平行称取6份,各加入一定量的槲皮素对照品,制备成供试品溶液,在所确定的色谱条件下进行测定。结果槲皮素平均加样回收率为99.24%,RSD＝0.70%,说明该方法准确可靠。结果见表1。表1  加样回收率试验结果（略）

　　2.9  样品测定

    取3个不同产地鹿蹄草,测定其中槲皮素含量,结果见表2。表2  鹿蹄草中槲皮素含量测定结果(略)

　　3  讨论

    本试验曾经考查了直接加甲醇超声后测定鹿蹄草中槲皮素的含量,结果色谱峰的峰形不理想,而且槲皮素的提取也不充分。

    对于水解条件的选择,本试验考察了不同浓度的甲醇及提取时间和盐酸浓度及酸水解时间的影响。结果显示,用甲醇-10%盐酸(3∶1)回流1 h,能使鹿蹄草中的槲皮素以苷元形式水解完全。

    在色谱条件摸索时,发现流动相pH值对色谱峰的峰形及分离度影响很大,比较甲醇与不同浓度的磷酸溶液等多种溶剂系统,确定流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50),得到的色谱峰峰形及分离度较好,并且基线稳定。

【参考文献】
  　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.226.

　　[2] 罗定强,杨燕子,宋 莉,等.中国特有鹿蹄草属植物的研究进展[J].中草药,2004,35(4)：463