芫花根质量标准研究

　　3.2.2  供试品溶液的制备 

　　取芫花根样品约5 g,置100 mL具塞锥形瓶中,准确加入三氯甲烷50 mL,超声(功率250 W,频率40 kHz)30 min,滤过,用少量三氯甲烷洗涤残渣,洗液并入滤液中蒸干,残渣加50 mL甲醇,称重,回流1 h,放置,待其冷却至室温,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液过微孔滤膜(0.22 μm),即得供试品溶液。

　　3.3  线性关系考察

　　取对照品溶液(0.023 5 μg/μL),分别进样2、4、6、8、10、12 μL,以芫花酯甲的进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得芫花酯甲的回归方程为：Y＝2 768 985.32X－
19 820,r＝0.999 6,结果表明进样量在0.047～0.282 μg范围内线性关系良好。

　　3.4  方法学考察

　　3.4.1  精密度试验 

　　精密吸取同一样品5 μL,连续进样5次,按上述色谱条件测定峰面积,RSD＝1.43%,表明仪器性能良好。

　　3.4.2  重复性试验 

　　取同一样品5份,按照供试品溶液的制备方法制备,分别进样5 μL,测定芫花酯甲的峰面积并计算含量,平均含量为0.023 6%,RSD＝1.69%(n＝5),表明本方法重复性较好。

　　3.4.3  稳定性试验 

　　精密吸取同一样品,分别在样品制备后0、2、4、8、16、24 h进样5 μL,测定芫花酯甲的峰面积,RSD＝1.28%,表明样品溶液在24 h内稳定。

　　3.4.4  加样回收率试验 

　　精密称取样品6份,各约2.5 g,分别精密加入对照品0.60 mg,按“3.2.2”项下方法制备供试液,分别精密吸取5 μL,测定芫花酯甲含量及加样回收率,结果平均回收率为99.2%,RSD＝2.00%。见表1。

　　3.5  样品测定

　　精密吸取按“3.2”项下方法制备的对照品溶液和供试品溶液各5 μL,分别进样测定。含量测定结果见表2,色谱图见图1。表2  芫花根样品含量测定结果（略）

　　4  讨论
   
　　薄层色谱显色条件的选择：本试验对比了偏钒酸铵-硫酸溶液显色和薄层板用荧光板在254 nm下检视为暗斑点两种显色方法。用荧光板点样量小,分离效果好,容易观察；同时发现用偏钒酸铵-硫酸显色,放置一段时间后,在自然光下芫花酯甲显蓝紫色斑点,效果比直接观察红棕色斑点好。
   
　　供试品溶液制备方法的选择：参考文献[2]的方法,经试验确定,选择三氯甲烷超声30 min、溶剂用量为50 mL的甲醇提取为最佳方法。检测波长的确定：采用光电二极管阵列检测器在200～400 nm对芫花酯甲色谱峰进行全波长扫描,发现在238 nm处有最大吸收,因此,选择238 nm为检测波长。
   
　　本试验测定了芫花根、根皮、木心、市售根饮片,发现市售根饮片经过浸泡、切制后,芫花酯甲的含量明显降低；在临床应用芫花根的时候可以去除体积较大的木心,直接应用根皮。本方法简便,准确性高,能够提高芫花根药材的质量标准,对于保证其临床药效具有参考价值。

【参考文献】
  　　[1] 应百川,王成瑞,周炳南,等.芫花根有效成分的研究[J].化学学报,1975, 35(1)：103－107.

　　[2] 黄兰岚,李娆娆,原思通,等.不同产地芫花药材中芫花酯甲含量比较[J].中成药,2008,30(10)：附10－12.