高效液相色谱法同时测定甘草中甘草酸、甘草苷、异甘草素的含量
作者：陈云华,赵晓霞,王文全,段天璇
【摘要】 目的 建立同时测定甘草中甘草酸、甘草苷和异甘草素含量的方法。方法 采用高效液相色谱法对甘草粉末的67%甲醇提取物进行分析。用C18反相色谱柱,1%磷酸水-乙腈梯度洗脱,对不同色谱峰分别采用248、276、360、370 nm紫外波长检测。结果 甘草酸的回归方程为Y＝1×106X＋16 220,r2＝1；甘草苷的回归方程为Y＝2×106X＋49 444,r2＝0.999 5；异甘草素的回归方程为Y＝1×107X＋4.466 7,r2＝1。甘草酸、甘草苷和异甘草素的加样回收率分别为98.01%、102.63%、98.18%。结论 本方法准确、稳定、可靠,可用于甘草中甘草酸、甘草苷和异甘草素3种成分的同时测定。
【关键词】 甘草；甘草酸；甘草苷；异甘草素；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To develop a HPLC quantitatively test method of glycyrrhizin, liquiritin and isoliquritigenin simultaneously for licorice. Methods The 67% methanol extracts of licorice powder were analyzed by reverse-phase HPLC on an ODS column, using a gradient elution with a mixture of 1% H3PO4 and acetonitrile. The eluate was monitored by UV absorption at 248, 276, 360 and 370 nm. Results The linear equation of glycyrrhizin was Y＝1×106X＋16 220, r2＝1. The linear equation of liquiritin was Y＝2×106X＋49 444, r2＝0.999 5. The linear equation of isoliquritigenin was Y＝1×107X＋4.466 7, r2＝1. The recovery rate of glycyrrhizin, liquiritin and isoliquritigenin was 98.01%, 102.63% and 98.18% respectively. Conclusion The method is accurate, stable amd reliable, and can be used to determine the three main chemical contents simultaneously.
Key words：Licorice；glycyrrhizin；liquiritin；isoliquritigenin；HPLC；content determination
在甘草质量研究中,建立稳定可靠的甘草多种成分含量测定非常必要。甘草酸、甘草苷、异甘草素是甘草中代表性成分,甘草酸是皂苷类代表,甘草苷是黄酮类代表,而异甘草素是一种异黄酮类成分。我们此次在以往工作的基础上[1],完善了甘草含量测定方法,使其同时可以对甘草酸、甘草苷、异甘草素进行含量测定。
1 仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪(配有G1314A紫外检测器、1315B DAD检测器、G1311A四元梯度泵、G1322A在线脱气装置、G1316A柱温箱)；Agilent 1100化学工作站；Sartorius BS110S 1/万、BP211D 1/(10万)电子分析天平；KL3120D超声清洗机。
甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch. 3年生采自甘肃总寨,1～5年生采自内蒙古杭锦旗,由北京中医药大学王文全教
授鉴定。60 ℃干燥过夜并粉碎。甘草酸、甘草苷、异甘草素对照品(批号分别为060520、061009、060801)由上海康九化工公司提供(供含量测定用)。乙腈为色谱纯；水为市售娃哈哈纯净水；甲醇、甲酸、磷酸、冰醋酸为分析纯。
2 方法与结果
2.1 检测波长的确定
分别称取甘草酸、甘草苷、异甘草素对照品适量,分别加甲醇配制成每1 mL约含0.1 mg的对照品溶液。以甲醇为空白,在波长190～400 nm范围内扫描,结果甘草酸的最大吸收波长为248 nm和360 nm,甘草苷的最大吸收波长为276 nm,而异甘草素的最大吸收波长为370 nm。
2.2 色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbax Extend分析柱(4.6 mm×250 mm,
5 μm)；柱温：25 ℃；进行梯度洗脱,流动相A为1%磷酸水溶液,流动相B为乙腈；梯度程序、流速及检测波长变化见表1。进样量为10 μL。表1 流动相梯度条件及检测波长（略）
2.3 供试品溶液的制备
精密称取甘草粉末(过60目筛,60 ℃干燥12 h)0.1 g,置25 mL容量瓶中,加入20 mL 67%甲醇冷浸24 h,超声30 min,放至室温,加67%甲醇至刻度,摇匀,以0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液即得。