高效液相色谱法测定利咽颗粒中绿原酸的含量

　　2.3  干扰性试验
   
　　分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,在上述色谱条件下进样10 μL,分别进行测定,记录色谱图。结果供试品溶液及对照品溶液在相同保留时间处有吸收峰,阴性对照在相应位置无吸收峰,样品中绿原酸峰与其他峰完全分离,分离度较好,阴性对照溶液对绿原酸测定无干扰,结果见图1。

　　2.4  线性关系考察
  
　　精密吸取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,置10 mL量瓶中,以50%甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取上述稀释液及对照品溶液10 μL,在上述色谱条件下依法测定峰面积,以峰面积为纵坐标,绿原酸对照品进样量为横坐标,得回归方程：Y＝12 637.79X－2.74,r＝0.999 9(n＝6),结果表明,绿原酸进样量在0.026～0.26 μg范围内具有良好的线性关系。

　　2.5  精密度试验

    精密吸取对照品溶液(0.052 mg/mL)10 μL,连续进样6次,记录峰面积,RSD＝0.55%(n＝6),结果表明精密度良好。

　　2.6  稳定性试验

    精密吸取同一供试品溶液10 μL,l2 h内每隔一定时间测定1次,记录峰面积,RSD＝1.09%(n＝6),表明供试品溶液在室温条件下12 h内稳定。

　　2.7  重复性试验

    取同批样品5份,分别依法平行操作,测定每份样品中绿原酸含量,结果平均值为0.278 mg/g,RSD＝1.57%(n＝5),表明本法重复性良好。

　　2.8  加样回收率试验

    精密量取已知含量的同一批样品6份,精密加入一定量的绿原酸对照品,按本法进行含量测定并计算回收率,平均回收率为101.84%,RSD＝0.48%(n＝6)。结果见表1。表1  加样回收率试验结果(略)
 
　　2.9  样品含量测定
   
　　取3批样品,分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l0 μL,按上述色谱条件测定,每批样品平行测定3次,按外标法计算绿原酸的含量,结果见表2。表2  样品含量测定结果(略)
 
　　3  讨论

    绿原酸为含有羟基和邻二酚羟基的弱有机酸,易溶于水和甲醇。由于样品中其他成分的互相影响,在供试液制备时,曾分别用了2种不同溶剂进行考察：以甲醇为溶剂,溶液出现混浊,沉淀较多；以50%甲醇溶液为溶剂,溶液澄清均一,操作既简单直接,又可保证待测成分不损失,结果精密度较为满意,故采用50%甲醇溶液为本试验供试液制备的溶剂。当流动相的配比为乙腈-0.4%磷酸(13∶87)时,绿原酸峰与相邻杂质峰达到基线分离,分离度＞1.5,表明色谱系统良好。
   
　　本法操作简便,测定结果准确可靠,为利咽颗粒质量标准的完善提供了可借鉴的依据。

【参考文献】
  　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.152－153.

　　[2] 黄璐琦,王永炎.中药材质量标准研究[M].北京：人民卫生出版社, 2006.387－445.

　　[3] 张广春,赵 昕,王旭明,等.高效液相色谱法测定咽舒糖浆中绿原酸的含量[J].药学实践杂志,2004,22(4)：228