高效液相色谱法测定大风丸中蛇床子素的含量

　　2.2  溶液的制备

    对照品溶液的制备：精密称取蛇床子素对照品适量,加甲醇制成每1 mL中含蛇床子素40 μg,摇匀,即得。

    供试品溶液的制备：取本品研细,取约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入10 mL甲醇,称定重量,超声(功率135 W,频率59 kHz)20 min,放冷后再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

　　2.3  线性关系考察

    精密称取蛇床子素对照品适量,用甲醇溶解,制成每1 mL含1.01 mg蛇床子素的溶液。分别精密吸取适量,稀释成10.1、20.2、40.4、60.6、80.8 μg/mL 5个不同浓度样品,分别吸取上述溶液各10 μL进样,测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,蛇床子素的浓度为横坐标绘制标准曲线,得回归方程：Y＝9.964 406×10-3X－1.355 684×10-1,r＝0.999 5(n＝5),表明蛇床子素在0.101～0.808 μg之间呈良好的线性关系。

　　2.4  精密度试验

　　精密吸取对照品溶液(40.4 μg/mL)10 μL,连续进样5次,记录峰面积,结果RSD＝0.63%,表明本法精密度良好。

　　2.5  重复性试验

    取本品(批号20070401)20丸,研细,混合均匀,取5份,每份0.5 g,精密称定,照供试品溶液制备方法制成供试品溶液,照上述色谱条件进行测定,结果RSD＝0.64%,表明本法重复性良好。

　　2.6  稳定性试验

    取同一供试品溶液(批号20070401),分别在0、2、4、6、8 h进样10 μL,测定蛇床子素峰面积,RSD＝3.29%(n＝5),表明供试品溶液在8 h内稳定。

　　2.7  加样回收率试验

　　精密称取已知含量的同一批号供试品(批号20070401,蛇床子素含量0.988 3 mg/g)6份,取样量为0.25 g,精密称定,分别加入蛇床子素对照品,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,进样量10 μL,测定蛇床子素峰面积,计算蛇床子素含量(见表1),平均回收率为98.4%,RSD＝1.40%(n＝6)。  表1  加样回收率试验结果（略）

　　2.8  样品含量测定

　　按照供试品溶液制备方法制备3批供试品溶液并进行含量测定,结果见表2。表2  含量测定结果（略）

　　2.9  阴性试验

　　取缺独活的样品,按供试品溶液制备法制备阴性样品,进样测定,在蛇床子素相应位置无峰出现,说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图1。

　　3  讨论

    本品中每克含独活以蛇床子素(C15H16O3)计,均不少于0.9 mg,由于各地独活药材差别较大,因此,暂定本品每克含独活以蛇床子素(C15H16O3)计,不得少于0.8 mg。

    供试品溶液制备中对超声时间进行了试验,分别超声处理(功率135 W,频率59 kHz)10、20、30 min,结果超声20 min即可提取完全。采用高效液相色谱法测定蛇床子素含量,方法简便快速,稳定可靠,专属性强。

【参考文献】
  　[1] 李 立,丁 刚,吴菊蕙,等.HPLC法测定风湿液中蛇床子素的含量[J].华西药学杂志,2000,15(3)：203－204.