高效液相色谱法测定木樨科苦丁茶中槲皮素的含量

               作者：陈艺文,李先荣,倪 艳,卢方晋  

【摘要】  目的 建立测定木樨科苦丁茶中槲皮素的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil ODS2 (4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-0.4%磷酸(47∶53)为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为360 nm。结果 槲皮素的线性范围为0.050 4～1.008 0 μg,r＝0.999 99；平均回收率为101.61%,RSD＝1.75%(n＝5)。结论 该方法简便、准确,可以作为木樨科苦丁茶的质量控制依据。

【关键词】  木樨科苦丁茶；槲皮素；高效液相色谱法；含量测定

    Abstract：Objective To set up the determining method of quercetinum in Kuding Cha of Ligustrum by HPLC. Method Hypersil ODS2 chromatographic column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was adopted. Methanol- 0.4% phosphoric acid (47∶53) was used as mobile phase, the flow rate was 1 mL/min, and the detecting wavelength was 360 nm. Result The linear range of quercetinum was 0.050 4～1.008 0 μg, r＝0.999 99, and the average recovery was 101.61% (RSD＝1.75%, n＝5). Conclusion The method is convenient and accurate, and can used be as basis of quality control for Kuding Cha of Ligustrum.

    Key words：Kuding Cha of Ligustrum；quercetinum；HPLC；content determination
 
    苦丁茶具有清热解毒、杀菌消炎、健胃消积、止咳化痰、生津止渴、提神醒脑的功效。随着对苦丁茶木樨科女贞属植物药理作用研究的深入,发现女贞属植物具有多种生理活性,它们的根、叶、果实大多具有清热、解毒、止痛、止血、止咳、抑菌及降压作用。为控制其质量,我们采用高效液相色谱法测定了其主要化学成分槲皮素的含量,现报道如下。

　　1  仪器与试药

    样品药材由山西省中医药研究院中药房提供,经鉴定为木樨科女贞属变紫女贞的干燥叶。槲皮素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号081-9304)。Agilent 1100高效液相色谱仪。甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与系统适用性试验

    色谱柱为Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm,5 μm)；甲醇-0.4%磷酸(47∶53)为流动相；检测波长360 nm,柱温30 ℃,理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于4 000。色谱图见图1。

　　2.2  供试品溶液的制备

    取本品粉末(过3号筛)约1.0 g, 精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加80%甲醇25 mL,密塞,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10 mL,加入盐酸1 mL,置90 ℃水浴锅中加热回流1 h,取出,立即冷却,转移至25 mL量瓶中,加80%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

　　2.3  对照品溶液的制备

    精密称取槲皮素对照品2.52 mg,置50 mL量瓶中,加80%甲醇至刻度,摇匀,即得每1 mL含50.4 μg的溶液。

　　2.4  线性关系考察

    分别精密吸取槲皮素对照品溶液(50.4 μg/mL)1、2.5、5、10、15、20 μL进样,按上述色谱条件测定。以峰面积(积分值)为纵坐标,进样量(μg)为横坐标做图,计算回归方程。回归方程为：Y＝3 675X＋0.283 1,r＝0.999 99,结果表明,槲皮素进样量在0.050 4～1.008 0 μg范围内呈良好线性关系。

　　2.5  精密度试验

    精密吸取槲皮素对照品溶液(50.4 μg/mL)10 μL,重复进样5次,结果峰面积的平均值为1840.8,RSD＝0.86%。