HPLC法测定舒筋接骨片中血竭素的含量

    吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL,分别注入液相色谱仪,按确定的方法检测。结果供试品溶液在与对照品相同的保留时间处有相同的血竭素峰,而阴性对照品没有,说明测定的专属性好。色谱图见图1。

　　2.4  精密度试验

    吸取对照品溶液20 μL,如法连续测定5次,测得峰面积,结果RSD＝0.31%,说明此法测定的精密度较高。

　　2.5  稳定性试验
   
　　取供试品(批号20061201)溶液,每隔2～4 h测定1次,共测定5次,结果供试品溶液在12 h内稳定性较好,RSD＝0.60%。

　　2.6  重复性试验

    取本品(批号20061203),按确定的方法测定血竭素的含量,共测定5次,结果血竭素的平均含量为0.371 2 mg/g,RSD＝1.8%,证明本法测定的重复性好,变异系数小,符合含量测定的要求。

　　2.7  加样回收率试验
   
　　为了观察测定方法能否准确的测定出制剂中血竭素的含量,按确定的方法测定了样品中血竭素的含量,进行加样回收率试验。称取已知含量的制剂(批号20061202, 0.370 4 mg/g),研细,取约0.5 g,精密称定,共6份,置具塞锥形瓶中,分别精密加入血竭素高氯酸盐对照品溶液(0.050 6 mg/mL)5.0 mL、3%磷酸甲醇溶液45 mL,如法测定,计算血竭素的回收率,结果见表1。可知本测定方法的回收率高,符合含量测定的要求。表1  加样回收率试验结果（略）

　　2.8  样品的测定
   
　　取本品3批,每批样品取3份,分别按上述方法制得供试品溶液,按确定的方法测定样品中血竭素的含量,结果见表2。表2  样品中血竭素含量测定结果(略)

　　3  讨论

    在流动相的选择过程中,首先试验了2005年版《中华人民共和国药典》(一部)血竭项下含量测定所用的流动相系统：乙腈-0.2%磷酸二氢钠溶液(50∶50),又试验了文献中报道的流动相系统：乙腈-0.1%磷酸(25∶75)。结果乙腈-0.1%磷酸(25∶75)为流动相较以乙腈-0.2%磷酸二氢钠溶液(50∶50)为流动相,血竭素保留时间短且峰形较好,有利于缩短检测时间。

    据文献报道,纯血竭素性质极不稳定[4],中药血竭存在对热不稳定性[5],不同的温度对其稳定性影响程度不同,温度在70 ℃以下时对血竭素含量几乎无影响,稳定性较好；而在70 ℃以上时则随温度升高血竭素含量下降明显加快。故本制剂供试品溶液的制备采用超声提取的方法。本试验研究了不同超声处理时间对提取结果的影响,结果超声处理10 min,血竭素即可较好提取。

    本研究制定的含量测定方法简便、可行、结果可靠,可作为控制该制剂质量的方法。

【参考文献】
  1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.96.

　　[2] 李忠琼,向 东.HPLC测定龙血竭中龙血素A和龙血素B的含量[J].华西药学杂志,2005,20(4)：348－349.

　　[3] 邹桂欣,尤献民,王树实,等.HPLC法测定胃溃疡胶囊中血竭素的含量[J].辽宁中医杂志,2003,30(4)：310－311.

　　[4] 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京：中国医药科技出版社,1994.514.

　　[5] 徐淑卿,沙 明,孟宪生.血竭的稳定性研究[J].中成药,2005,27(5)：598－599.