HPLC法测定蛤蚧中胆甾醇含量

　　2.7  稳定性试验

    取同一份供试品溶液,分别于2、4、6、8、10、12 h进样分析,记录胆甾醇峰面积,结果RSD＝3.65%,表明样品溶液在12 h内性质稳定。

　　2.8  重复性试验

    取同一批蛤蚧药粉共6份,每份0.5 g,精密称量,按照“2.3”项下方法制备供试品溶液,进样测定胆甾醇峰面积,结果RSD＝2.75%,表明该条件重复性好。

　　2.9  回收率试验
  
　　精密称取已知含量的蛤蚧药粉(070708)6份,分别精密加入一定量的胆甾醇对照品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定胆甾醇的含量,计算回收率,结果见表1。表1  回收率测定结果(略)

　　2.10  样品测定
   
　　取蛤蚧药粉5批,按“2.3”项下供试品溶液制备方法,按上述色谱条件进行含量测定,用外标法计算。5批样品的胆甾醇含量见表2。表2  样品中胆甾醇含量测定结果（略）

　　3  讨论

    蛤蚧样品采用石油醚作提取溶剂,索氏提取器回流提取,并用紫外扫描的方法监测提取终点,大约5 h时提取液在紫外208 nm处无吸收,因此,确立样品回流提取时间为5 h,试验表明,该法提取完全,回收率好。
   
　　在对蛤蚧脂溶性提取物进行皂化时借鉴了微型皂化方法[4],分别考察了2、3、4、5 mL的0.5 mol/L氢氧化钾的乙醇皂化效果,确定4 mL为皂化最佳剂量。
   
　　文献报道中有用电化学检测器[5]、蒸发光散射检测器[6]的高效液相色谱法测定胆甾醇含量。本试验采用紫外检测器的高效液相色谱法,选用Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以甲醇作流动相就可以达到良好的分离效果,而且峰形对称,分离时间适中。本方法简单,出峰时间快,结果线形,精密度试验、回收率试验均较满意。

【参考文献】
  [1] 高瑜莹,裘爱泳,潘秋琴.植物甾醇的分析方法[J].中国油脂,2001,(1): 25－28.

　　[2] Abidi SL. Chromatographic analysis of plant sterols in foods and vegetable oils[J]. Chromatography A,2001,935：173－201.

　　[3] 李 琼,党 志,文 震,等.高效液相色谱测定海龙中胆甾醇[J].理化检验·化学分册,2005,41(4)：275－276.

　　[4] J Lopez-Cervantes, DI Sanchez-Machado, NJ Rios-Vazquez. High- perfomance liquid chromatography method for the simultaneous quantification of retinol,α-tocopherol,and cholesterol in shrimp waste hydrolysate[J]. J Chromatography A,2006,1105：135－139.

　　[5] 孙赛龙,赵志萍,谢建龙,等.高效液相色谱法检测蛋黄卵磷脂中胆甾醇的含量[J].精细化工中间体,2003,33(4)：52－53.

　　[6] Kazuhiro Hojo, Hideki Hakamata, Ayumi Ito, et al. Determination of total cholesterol in serum by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection[J]. J Chromatography A,2007,1166：135－141.