红芪总黄酮对人白血病细胞诱导分化的影响

　　3.2  细胞表面标记检测
   
　　分别用60、80、100 mg/L红芪总黄酮处理第48 h后,HL-60细胞CD11b表达阳性率分别为(26.7±3.3)%、(48.3±7.3)%、 (55.2±6.6)%,较未加药组(2.7±1.1)%明显升高(P<0.01)。

　　3.3  细胞周期及凋亡率检测
  
　　结果显示,用60～100 mg/L红芪总黄酮处理48 h,HL-60细胞周期阻滞于G0/G1、G2/M期,并有一定的浓度依赖关系。相应S期细胞减少。但促进细胞凋亡的作用不明显(见表1)。表1  红芪总黄酮对HL-60细胞周期及凋亡率的影响(略)注：与对照组比较,△P<0.05,△△P<0.01

　　3.4  分化相关基因检测

　　(见表2)表2  红芪总黄酮对HL-60细胞C-fos表达的影响(略)注：与对照组比较,△△P<0.01

　　4  讨论

    近年来,中药以其有效、低毒的优势作为治疗肿瘤的疗法日益受到人们的重视,一些草药及自然产物正被应用于肿瘤治疗的临床实验中[3-4]。已有的实验结果表明,一些草药及其成分具有直接抑制肿瘤细胞增殖的药理作用[5]。因此,从中草药中寻找低毒、有效的抗癌成分已成为研究人员格外重视的领域。

    本研究结果显示,HL-60细胞经红芪总黄酮处理后,NBT 还原能力明显增强,CD11b表达升高,提示早幼粒细胞通过红芪总黄酮诱导分化作用逐渐获得了成熟粒细胞表面标志及功能。红芪总黄酮作用后,HL-60细胞被阻滞于G0/G1期、G2/M期,S期细胞明显减少,从而导致细胞增殖减慢,趋向分化。
   
　　细胞增殖与分化受到增殖分化相关基因的调控。C-fos原癌基因编码分子量为55KD,含380个氨基酸残基的蛋白质Fos。C-fos是对某些生长因子和分化诱导剂刺激反应最早的早期应答基因(early response gene)之一,其基因产物与诱导分化有关,在成熟的粒细胞和单核细胞中高度表达,在未分化的人早幼粒细胞中却不表达[6],其编码的蛋白质为DNA结合蛋白,以第三信使的方式参与调控其它基因的表达[7]。在本实验中,经红芪总黄酮作用后的HL-60细胞C-fos蛋白表达升高,提示C-fos基因可能是红芪总黄酮作用的靶分子。因此,红芪总黄酮促进HL-60细胞分化的分子机制可能是通过调控增殖、分化相关基因表达,抑制DNA合成与转录,减少S期细胞数目,延长细胞倍增时间,从而抑制细胞生长,诱导细胞分化。

【参考文献】
  1] Hong J, Ishihara K, Yamaki K, et al. Apicidin, a histone deacetylase inhibitor, induces differentiation of HL260 cells[J]. Cancer Lett, 2003,189(2)：197－206.

　　[2] 梁 勇,羊裔明,袁淑兰,等.丹参酮ⅡA诱导早幼粒白血病细胞分化及其分子机制研究[J].中华血液学杂志,2000,21(1)：23－26.

　　[3] McCann J. Texas center studies research alternative treatments[J]. J Natl Canaer Inst,1997,89(20)：1485－1486.

　　[4] Cassileth BR, Chapman CC. Alternative and complementary cancer therapies[J]. Cancer,1996,77(6)：1026－1034.

　　[5] 蒋 艳,王 毅,郝 钰,等.小檗碱对人高转移肺癌系(PG)细胞增殖的影响及机制研究[J].中国病理生理杂志,2005,21(11)：2172.

　　[6] Deshpande RV, Moore MA. G-CSF receptor-mediated up-regulation of C-fos but not C-caf mRNA expressionin myeloid cells[J]. Mol Cell Biochem,1998,178(6)：47－50.

　　[7] Richon VM, Webb Y, Merger R, et al. Second generation hybrid polar compounds are potent inducers of transformed cell differentiation[J]. Proc Natl Acad Sci USA,1996,93：5705－5708.