当归、白术、制白附子多糖对小鼠免疫调节作用的影响

                  作者：孙文平,李发胜,侯殿东,刘辉

【摘要】  目的 以中药植物多糖作为抗原,探讨其对小鼠免疫系统的激发特点,为多糖在免疫调节功能方面的应用提供科学依据。方法 取当归、白术、制白附子3种中药植物水溶性多糖为抗原,分别给予小白鼠免疫刺激,采用ELISA法检测小鼠血清中的相应抗体及交叉抗体。结果 3种中药植物类水溶性多糖均能刺激小鼠产生特异性IgG类抗体及非特异性交叉抗体,不同多糖刺激产生非特异抗体范围不同。结论 中药多糖可能是一种泛特异广谱免疫调节剂。

【关键词】  多糖；当归；白术；制白附子；免疫调节；小鼠

      一般认为,多糖可刺激机体产生IgG型抗体,IgG型抗体分子量大,分布局限,实际免疫作用有限[1],而中药植物多糖是否可以刺激机体产生IgG型抗体尚没有统一的看法。本实验用随机选择的当归、白术、制白附子3种中药植物多糖作为抗原,同时用其他种类的多糖作为对照,探讨其对小鼠免疫系统的激发特点。

　1  材料与方法　

1.1  动物    昆明种小鼠,雌雄兼用,体重(20±2)g,大连医科大学实验
动物中心提供。　1.2  多糖    当归多糖、白术多糖、制白附子多糖由大连医科大学临床免疫教研室制备[2],无菌称取纯化的当归、白术、制白附子多糖各4.00 g,用蒸馏水定容至200 mL,4 ℃保存备用。取可溶性淀粉(北京红星化工厂,批号20040211)10.00 g,用蒸馏水定容至200 mL,4 ℃保存,为对照用。
    按文献[3]方法制备伤寒多糖(将伤寒杆菌诊断菌液80 mL置水浴锅中煮2 h,离心取上清,即菌体多糖),4 ℃保存,为对照用。

　　1.3  分组及给药

    取小白鼠280只,随机均分成空白对照组、当归多糖组、白术多糖组、制白附子多糖组、可溶性淀粉多糖组、伤寒多糖组。小鼠自由饮食。初次免疫：实验第1日,各实验组小鼠均于大腿内侧腹股沟皮下注射相应的抗原,对照组注射生理盐水,0.2 mL/只,小鼠自由饮食。加强免疫：实验第7日同方案加强注射1次,小鼠正常饮食。实验第14日,小鼠眼球取血,离心分离血清,分装备检。

　　1.4  特异性IgG抗体的检测
   
　　用2%当归、白术及制白附子多糖、5%可溶性淀粉多糖及1∶20稀释伤寒多糖,每孔100 μL包被酶标板。主要步骤如下：将包被板洗涤拍干,各孔加1∶5稀释的待测血清100 μL,37 ℃孵育30 min,洗涤拍干,各孔加1∶40稀释的冻干酶联葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)100 μL,孵育洗涤拍干,加底物及终止液。采用ELISA方法[4]检测相应IgG抗体,以OD值表示抗体水平。

　　1.5  多糖免疫后小鼠交叉抗体的检测

　　1.5.1  免疫血清在各相应多糖包被板中交叉抗体检测 

　　各组免疫血清5倍稀释后分别加到当归、白术、制白附子、可溶性淀粉、伤寒多糖及乙型肝炎病毒表面抗原包被的酶标反应板中。检测多糖免疫后小鼠交叉抗体产生情况。

　　1.5.2  多糖免疫前后小鼠类风湿因子检测 

　　将各组免疫血清及对照血清1∶5稀释后与胶乳试剂(上海伊华医学科技有限公司,批号20040311)作用,检测多糖免疫前后小鼠类风湿因子产生情况。

　　1.5.3  多糖免疫前后小鼠“血型抗体”检测 

　　将各组免疫血清及对照血清与制备好的人标准红细胞等量混合,观察凝集反应现象,检测多糖免疫前后小鼠“血型抗体”的变化。