清燥润肺合剂质量标准研究

                作者：周娟娟,潘金火,卢欢,朱和平,潘文

【摘要】  目的 建立清燥润肺合剂的质量标准。方法 采用薄层色谱法对制剂中桑叶、甘草、北沙参、麦冬、枇杷叶进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对制剂中甘草酸含量进行测定。结果 薄层色谱中阴性无干扰,专属性强；甘草酸在0.203 1～1.692 1 μg范围内线性关系良好,r＝0.999 8,平均回收率为98.24%,RSD＝2.62%。结论 本试验建立的方法简便、快捷,重复性好,可用于清燥润肺合剂的质量控制。

【关键词】  清燥润肺合剂；质量标准；甘草酸；高效液相色谱法；薄层色谱法

    Key words：Qingzao Runfei Mixture；quality standard；glycyrrhizic acid；HPLC；TLC
 
    清燥润肺合剂由桑叶、石膏、甘草、黑芝麻、北沙参、麦冬、枇杷叶等9味药材组成。具有清燥润肺之效,用于燥气伤肺、干咳无痰、气逆而喘、咽干鼻燥、心烦口渴等病症。笔者根据处方组成药物的理化性质[1]及反复试验,对桑叶、甘草、北沙参、麦冬、枇杷叶进行了鉴别,同时,采用高效液相色谱法测定了制剂中甘草酸的含量,建立了可靠、稳定、简单的质量控制方法。

　　1  仪器与试药

    Agilent1100高效液相色谱仪,Agilent1100紫外检测器,HP Chemstations工作站。清燥润肺合剂10批样品由扬州市三药制药有限公司生产并提供(批号为061101、061102、061103、061104、061105、061106、061107、061126、061128、061130)；甘草药材购自扬州市药材公司(由扬州市三药制药有限公司提供,批号为060912、060920、060928),经南京中医药大学王春根教授鉴定为豆科植物甘草的干燥根及根茎；甘草酸铵对照品购自中国药品生物制品检定所(批号110731- 200511)。硅胶G由青岛海洋化工厂生产；所有试剂由上海久亿化学试剂有限公司生产,均为分析纯或色谱纯。

　　2  定性鉴别

　　2.1  桑叶

    取桑叶对照药材2 g,加石油醚(60～90 ℃)20 mL,超声处理20 min,弃去石油醚液,药渣挥干,加无水乙醇30 mL,超声处理20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水30 mL使溶解,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为对照药材溶液。取本品20 mL,蒸干,残渣加80%乙醇50 mL,超声处理20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水30 mL使溶解,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。取除桑叶以外的其它8味药材按处方比例制得的阴性样品20 mL,用与供试品溶液制备相同的方法制得阴性对照液。

    吸取上述3种溶液各5 μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)的上层溶液为展开剂,置于展开剂预饱和20 min的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱对应的位置上,显示相同颜色的荧光斑点,而阴性对照液无此斑点。

　　2.2  甘草[2]

    取甘草对照药材1 g,加乙醚30 mL,超声处理20 min,滤过,药渣挥干,加甲醇30 mL,超声处理20 min,滤过,滤液挥干,残渣加水30 mL使溶解,滤过,用水饱和的正丁醇萃取2次,每次20 mL,合并正丁醇液,用水洗涤2次,每次20 mL,取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为对照药材溶液。取本品10 mL,加乙醚30 mL,超声处理20 min,静置分层,置分液漏斗中,分出水层,用水饱和的正丁醇提取2次,每次20 mL,合并正丁醇液,用水洗涤2次,每次20 mL,取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。取除甘草以外的其它8味药材按处方比例制得的阴性样品10 mL,按供试品溶液制备方法制得阴性对照液。

    吸取上述3种溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照液无干扰。

　　2.3  北沙参

    取北沙参对照药材5 g,加乙醚30 mL,加热回流1 h,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为对照药材溶液。取本品10 mL,蒸干,残渣加乙醇20 mL使溶解,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。取除北沙参以外的其它8味药材按处方比例制得的阴性样品10 mL,按供试品溶液制备方法制得阴性对照液。

    吸取上述3种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置氨缸内熏40 min,紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱对应的位置上,显示相同颜色的荧光斑点,阴性对照液无干扰。

　　2.4  麦冬

    取麦冬对照药材2 g,加水20 mL,加盐酸2 mL,煮沸2 min,放冷,滤过,滤液用三氯甲烷10 mL萃取,取三氯甲烷液,蒸干,残渣加三氯甲烷0.5 mL溶解,作为对照药材溶液。取本品10 mL,加盐酸1 mL,煮沸2 min,放冷,滤过,滤液用三氯甲烷10 mL萃取1次,取三氯甲烷液,蒸干,残渣加三氯甲烷0.5 mL使溶解,作为供试品溶液。取除麦冬以外的其它8味药材按处方比例制得的阴性样品10 mL,按供试品溶液制备方法制得阴性对照液。

    吸取上述溶液各约5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(20∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照液无干扰。

　　2.5  枇杷叶

    取枇杷叶对照药材5 g, 加水200 mL煎煮2 h,滤过,滤液用5%的氢氧化钠溶液调pH值至10,用乙酸乙酯40 mL萃取,浓缩,残渣加1 mL甲醇溶解,作为对照药材溶液。取本品10 mL,加水20 mL稀释,摇匀,滤过,用5%的氢氧化钠溶液调pH值至10,用乙酸乙酯40 mL萃取,浓缩,残渣加1 mL甲醇溶解,作为供试品溶液[3]。取除枇杷叶以外的其它8味药材按处方比例制得的阴性样品10 mL,按供试品溶液制备方法制得阴性对照液。

    吸取上述溶液各约10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(8∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照液无干扰。