清燥润肺合剂质量标准研究

　　3  含量测定

　　3.1  色谱条件

    以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸(63∶36.6∶0.4)为流动相；检测波长为250 nm；柱温30 ℃。理论塔板数按甘草酸峰计算应不低于3 000。

　　3.2  对照品溶液的制备

    精密称取甘草酸铵对照品,加甲醇制成0.207 3 mg/mL的溶液。精密量取5 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得0.103 65 mg/mL的对照品溶液。

　　3.3  供试品溶液的制备

    取10个批号的样品,每批取2份,分别精密量取20 mL,加水饱和的正丁醇20 mL,超声30 min,置分液漏斗中取正丁醇液。下层加水饱和的正丁醇20 mL萃取,合并正丁醇液,蒸干,残渣用甲醇定量转移至10 mL量瓶中,定容,摇匀,即得。

　　3.4  空白试验

    取除甘草以外的其它8味药材,按处方比例制得阴性样品,按供试品溶液的制备方法制得阴性对照液。精密吸取10 μL,连续进样3次。结果表明,空白对照液未检出与甘草酸铵对照液对应的色谱峰,视为空白无干扰。色谱图见图1。

　　3.5  线性关系考察
   
　　分别吸取浓度为0.103 65 mg/mL的甘草酸铵对照品溶液(折合甘草酸为0.101 53 mg/mL)2、4、6、8、10 mL,用甲醇定容至10 mL,各进样10 μL。以甘草酸铵平均峰面积为纵坐标,进样量(μg)为横坐标进行线性回归,得回归方程：Y＝721.62X－16, r＝0.999 8,指标成分甘草酸的线性范围为0.203 1～1.692 1 μg。

　　3.6  精密度试验

    精密吸取同一对照品溶液10 μL,连续进样5次,结果测得甘草酸铵峰面积值的RSD＝0.71%。

　　3.7  稳定性试验

    精密吸取批号为061105的样品溶液10 μL,每间隔2 h进样1次,连续考察10 h,峰面积的RSD＝0.74%,表明指标成分在10 h内比较稳定。

　　3.8  重复性试验

    取同一批号(061105)的样品5份,按“样品测定”项下方法测得样品中甘草酸铵的含量,RSD＝2.11%,表明重复性良好。

　　3.9  加样回收率试验

    取已知含量同一批号(061105)的样品6份,精密量取10 mL,分别精密加入浓度为0.103 65 mg/mL的甘草酸铵对照液4 mL,按供试品溶液的制备方法制得供试液。照“样品测定”项下方法测定,计算样品中甘草酸铵含量及加样回收率,结果见表1。表1  加样回收率试验结果（略）

　　3.10  样品测定
  
　　取10个批号的样品适量,按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。按上述色谱条件,分别进样10 μL,各进2针,用标准曲线法计算含量。10个批号样品甘草酸含量测定结果依次为0.031 8、0.038 3、0.039 3、0.037 1、0.038 9、0.038 6、0.038 5、0.038 9、0.039 1、0.039 1 mg/mL。 

　　4  讨论
   
　　在定性鉴别的选取上,因为苦杏仁中的主要成分是苦杏仁苷,且其他成分的含量很少,而枇杷叶中也同样含有苦杏仁苷,故未对苦杏仁进行试验；而阿胶、黑芝麻的鉴别,经过试验,阴性均有干扰；故暂未建立此3味药的鉴别方法。试验表明,上述桑叶、甘草、北沙参、麦冬、枇杷叶的鉴别专属性强,重复性好,操作简便。
   
　　本试验曾以甲醇为流动相A,水相为流动相B,其中水相由水-冰醋酸(100∶1)组成,A∶B＝66∶34,试验结果显示,甘草酸铵峰与其他组分峰分离效果不理想。经过试验,采取以甲醇为流动相A,水相为流动相B,其中水相由水-冰醋酸(100∶1)组成,A∶B＝63∶37,试验结果显示,甘草酸铵峰与其他组分峰分离效果理想,出峰时间合适。

【参考文献】
  1] 肖崇厚,杨松松,洪筱坤.中药化学[M].上海：上海科学技术出版社, 1997.168－170.

　　[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.59－60.