丹参药材水溶性成分含量的HPLC法分析
作者：李曼玲,冯伟红,康 琛,梁日欣,杨洪军,何希荣,黄璐琦
【摘要】 目的 建立丹参药材水溶性成分中丹酚酸B、丹参素和原儿茶醛的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Kromosil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相Ⅰ：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59),流动相Ⅱ：甲醇-冰醋酸-水(20∶1∶80)；流速：1.0 mL/min；检测波长分别为286、280 nm；柱温35 ℃。结果 测定了10个不同产地的丹参药材,丹酚酸B含量在0.09%～6.81%之间,平均回收率为99.64%,RSD＝1.09%；丹参素的含量在0.16%～0.68%之间,平均回收率为98.94%,RSD＝1.49%；原儿茶醛的含量在0.01%～0.09%之间,平均回收率为98.96%, RSD＝1.66%。结论 本法简便、准确、重复性好,可作为丹参药材的含量测定标准。
【关键词】 丹参；丹酚酸B；丹参素；原儿茶醛；高效液相色谱法
Key words：Salvia miltiorrhiza Bge.；Salvianolic acid B；Danshensu；Protocatechuic aldehyde；HPLC
丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎,味苦,性微寒,归心、肝经,具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的作用。用于月经不调,经闭通经,癥瘕积聚,胸腹刺痛,热痹疼痛,疮疡肿痛,心绞痛等。丹参的主要药效成分之一是丹参中的水溶性成分,主要是酚酸类化合物丹酚酸B、丹参素和原儿茶醛。我们采用HPLC法建立了这3种成分的含量测定方法,可用于丹参及其饮片和制剂的研究及质量控制等。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：HP1100高效液相色谱仪,G1315A DAD检测器,G1311A四元泵,G1313A自动进样器,G1316A柱温箱,G1322A在线脱气机,Agilent ChemStation色谱工作站。丹酚酸B对照品(批号200201)、丹参素钠对照品(批号855-200102)、原儿茶醛对照品(批号0801-9402)均为供含量测定用,购于中国药品生物制品检定所。乙腈：色谱纯,美国；甲醇：色谱纯,北京化工厂；高纯水：自制；其他试剂均为分析纯。丹参药材由本所生药室提供。
2 方法与结果
2.1 丹酚酸B的含量测定
2.1.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流速：1 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长λs＝286 nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于4 000。在此条件下丹酚酸 B与其他组分达到良好分离(见图1)。
2.1.2 供试品溶液的制备
取本品粉末(过3号筛)0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇50 mL,密塞,称定重量,加热回流1 h,取出,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。
2.1.3 对照品溶液的制备
取丹酚酸B对照品适量,加75%甲醇溶解并制成每1 mL含0.14 mg的溶液,即得。
2.1.4 标准曲线的绘制
分别精密吸取对照品溶液(0.14 mg/mL) 4、8、12、16、20 μL,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以丹酚酸B的进样量为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程：Y＝-0.153 6＋895.6X,r＝0.999 6,结果表明,丹酚酸B在0.56～2.8 μg范围内呈线性关系。
2.1.5 精密度试验
取供试品溶液1份,在上述色谱条件下连续进样5次,每次进样5 μL,测定丹酚酸B含量,经计算,RSD＝0.28%。
2.1.6 重复性试验
平行制备5份供试品溶液,分别在上述同一色谱条件下,分别进样5 μL,测定丹酚酸B含量,经计算, RSD＝2.24%。
2.1.7 稳定性试验
取供试品溶液1份,上述色谱条件下,分别于样品制备后第0、1、2、4、8、16、24 h进行测定,测定丹酚酸B含量,经计算,RSD＝1.76%。
2.1.8 加样回收率试验
取已知含量的丹参药材粉末,分别加入等量的丹酚酸B对照品,按上述色谱条件测定,计算回收率,丹酚酸B为99.64%,RSD＝1.09%。见表1。表1 丹酚酸B回收率试验结果（略）
2.1.9 含量测定
按供试品溶液制备方法,分别对10个不同来源丹参药材丹酚酸B的含量进行测定。结果见表2。表2 不同产地丹参药材丹酚酸B的含量测定结果（略）