虎杖、当归醇提工艺研究

　　2.4  正交试验优选醇提工艺

　　2.4.1  试验设计 

　　在确定醇提浓度与提取次数的基础上,采用正交试验法对虎杖、当归提取的其它工艺条件进行优选。选择浸泡时间、加醇量、提取时间作为考察因素,以浸膏得率与虎杖苷浸出量为评价指标,用L9(34)正交表安排试验。所选因素水平及正交试验方案见表1、表2。表1  醇提工艺正交试验因素水平表（略）表2  醇提工艺正交试验设计及结果（略）
  
　　2.4.2  试验结果 

　　依处方比例称取虎杖25.0 g、当归10.0 g,共9份,根据表2安排试验。由直观分析可知,以浸膏得率为评价指标,A、B、C三因素的极差(R)与离差平方和(Sj)均少于空白列相应的值,故可认为各因素对浸出均无影响。而以虎杖苷浸出量为评价指标,由直观分析可知,其最佳提取工艺条件为A2B3C1,各因素的主次顺序为B、C、A,其中B、C因素经方差分析表明,对虎杖苷浸出量有极显著性影响,A因素影响不明显(方差分析中,考虑A因素的SA比空白列的S空白小,故认为A因素对虎杖苷浸出量没有影响,并将SA与S空白合并作为误差估计,以提高分析的精确度,见表3)。根据上述分析,A因素无论是以浸膏得率还是以虎杖苷浸出量为指标,其对浸出均未见明显的影响,故可任取一个水平,为缩短生产时间,取A1为佳；B、C因素在上述2种评价指标中,均以B3、C1为佳。因此,可确定醇提工艺的最优条件为A1B3C1,即提取时加60%乙醇浸泡0.5 h,提取2次,加醇量分别为药材的10、8倍,提取时间分别为1.5、1.0 h。表3  虎杖苷方差分析表（略）注：*F0.05(2,4)=6.94,F0.01(2,4)=18.0；** SE=SA+S空白

　　2.4.3  验证试验 

　　由于优选的醇提工艺条件A1B3C1在正交表中没有出现,因此必须进行实验予以验证。
   
　　按处方比例称取虎杖25 g、当归10 g,按优选方案(A1B3C1)加60%乙醇进行提取,收集提取液,定容,测定浸膏得率及虎杖苷的浸出量。结果表明,优选方案(A1B3C1)重复3次试验的虎杖苷浸出量均稍高于正交表中浸出量最高的6号方案,从而证明这一方案合理可行(见表4)。表4  验证试验结果（略）

　　3  讨论

    正交试验设计是研究多因素多水平的一种设计方法,它是根据正交性从全部试验中挑选出部分有代表性的点进行试验,这些有代表性的点具备了“均匀分散,齐整可比”的特点,是一种高效率、快速、经济的试验设计方法。

    醇提提取工艺试验中,选用君药的有效成分虎杖苷作为提取的评价指标,客观地反映了提取工艺的优劣。通过正交试验等确定了醇提最佳工艺条件为：以60%的乙醇浸泡0.5 h,加热回流提取2次,加醇量分别为10、8倍,提取时间分别为1.5、1.0 h。虎杖苷提取率达83.5%,基本提取完全。

    本试验采用的虎杖苷含量测定方法,条件比较稳定,出峰时间短,分离效果好,可用于虎杖及其制剂的含量测定。

【参考文献】
  1] 杨西岳.虎杖及白藜芦醇的开发[J].天然产物分离,2005,3(3)：16－18.

　　[2] 谢 扬,朱秋华,刘瑞源,等.正交实验筛选虎杖甙提取工艺[J].中药材, 2004,27(9)：678－679.

　　[3] 张 峻.正交试验法优化虎杖提取工艺的实验研究[J].中国药学杂志, 2003,38(2)：154.