不同部位及生长年限云南红豆杉中紫杉醇含量的测定

　　2.5  精密度试验
   
　　取紫杉醇对照品溶液(0.050 4 mg/mL),重复进样5次,测得峰面积分别为1 381.736 2、1 379.435 3、1 375.796 6、1 384.467 2、1 360.445 6,RSD＝0.69%,表明仪器精密度良好。

　　2.6  稳定性试验

  　  取5年生枝叶供试品溶液,每隔2 h进样测定1次,共5次,测得其含量分别为0.062 8‰、0.063 2‰、0.063 7‰、0.064 2‰、0.063 4‰,RSD＝0.83%,表明样品溶液在8 h内测定稳定。

　　2.7  重复性试验
   
　　取5年生枝叶5份,按“2.4”项下方法分别提取,精制,测定,含量分别为0.063 4‰、0.064 1‰、0.063 9‰、0.062 6‰、0.061 3‰,RSD＝1.81%。

　　2.8  加样回收率试验
   
　　精密称取5年生枝叶1 g,置于100 mL锥形瓶中,分别加入浓度为0.012 mg/mL的紫杉醇对照品溶液5 mL,按“2.4” 项下方法制备供试品溶液,得5份供试品,分别对每份供试品按前述色谱条件进行测定。结果见表1。表1  紫杉醇加样回收率试验结果（略）
 
　　2.9  样品测定

 　   分别取5年生云南红豆杉的树皮、针叶、小枝和树根,按“2.4“项下方法制备供试品溶液,分别进样,测定。结果见表2。再分别取2年生、3年生、4年生、5年生云南红豆杉枝叶,按上述方法处理、测定。结果见表3。表2  云南红豆杉(5年生)不同部位中紫杉醇的含量测定结果（略）
表3  不同生长年限云南红豆杉枝叶中紫杉醇的含量测定结果（略）

　　3  讨论

　　3.1  药材提取溶剂的选择

  　  本实验曾试用了不同的溶剂进行提取,如甲醇、乙醇、氯仿、甲醇-二氯甲烷(1∶1)、乙酸乙酯-丙酮(1∶1),结果以乙酸乙酯-丙酮(1∶1)得膏率最低,提取率最高,提取2次就可以将紫杉醇提取完全。

　　3.2  样品制备方法的选择

   　 紫杉醇枝叶中紫杉醇的含量相对较低,且含有大量的叶绿素,杂质不易去除,对药材的处理方法曾试用了液-液萃取法、硅藻土吸附法、过A12O3柱、硅胶柱、固相萃取等方法,过A12O3柱、硅胶柱、固相萃取均能使紫杉醇达到较好的分离,但是,过A12O3柱、硅胶柱后的样品杂质较多,影响色谱柱的使用寿命,因此选用了固相萃取的方法。

　　3.3  色谱条件的选择

  　  紫杉醇和三尖杉宁碱结构比较相近,在液相色谱上的分离有一定难度,试验使用了苯基柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)、Hypersil ODS柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),结果以Hypersil ODS柱效果为好。流动相试用了甲醇-水(65∶35)、乙腈-水-四氢呋喃(25∶67∶8)、甲醇-乙腈-水(20∶30∶50),结果以甲醇-乙腈-水(20∶30∶50)系统最好。

　　3.4  结果分析
   
　　由表2可以看出,云南红豆杉树皮中紫杉醇的含量最高,根中最少,小枝、针叶中含量较高。但红豆杉植物生长缓慢,树皮量又少,而且剥去树皮会使树木死亡,长此以往必然导致资源枯竭。而红豆杉枝叶可以再生,且总量远远大于干皮,为保护资源,从云南红豆杉枝叶中获取紫杉醇具有重要的意义。由表3可知,随着生长年限的增加,云南红豆杉枝叶中紫杉醇的含量逐渐增加,因此枝叶的采摘以5年生以上为佳。

【参考文献】
  　　[1] Wheeler NC, Jech K, Masters S, et al. Effects of genetic, epigenetic, and environmental factors on taxol contentin Taxus brevifolia and related species[J].J Nat Prod,1992,55(4)：432.

　　[2] 方唯硕.紫杉醇的化学研究[J].中国药物杂志,1994,29(5)：259－261.