五味保肝丸定性定量实验研究

　　3.6 线性关系考察

　　精密量取“2.2”步对照品溶液2 ml，加甲醇定容10ml。分别准确吸取上述溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0μl 依次进样,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,五味子甲素进样量(μg) 为横坐标,绘制标准曲线。回归方程为: 五味子甲素Y=2643.253X-3.756，r=0.9999(n=5)，线性范围0.1264～1.5168μg。

　　3.7 精密度试验

　　精密吸取“2.2”步对照品溶液(浓度为0.2528mg/ml)2μl, 按“2.1”色谱条件连续进样5次, 测定峰面积RSD为1.42%(n=5)。精密度良好。

　　3.8 稳定性考察

　　精密吸取对照品溶液(浓度为0.2528mg/ml)2μl,分别于配制后0、2、4、8、16、24h进样,测定面积的RSD为1.81%，表明供试品溶液在24h内稳定。

　　3.9 重复性试验

　　精密称定研细的同一批(090901)样品粉末2.0g共5份,按“2.3”项方法制备5份样品溶液,各吸取10μl进样,测定面积的RSD值为0.99%(n=5)。表明方法重复性较好。

　　3.10 加样回收率实验

　　精密量取已知含量五味子样品液(五味子甲素浓度为0.04136μg/μl)5.0ml 6份, 分别精密加入浓度为0.2528mg/ml的对照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，并分别用甲醇定溶至10.0ml。分别进样10μl，测定,并计算回收率。结果见表1。表1 加样回收测定结果

　　3.11 样品含量测定结果

　　取5批五味保肝丸(降酶丸)样品，批号分别是：100312、100427、100604、100712、100802,按“2.3”步方法分别制备样品液，并进样，测定，计算，5批样品五味子甲素含量分别为0.3075、0.3121、0.2976、0.2684、0.2713mg/g。按5批样品含量测定结果，暂定降酶丸中五味子甲素含量不低于0.250mg/g。

　　4 讨论

　　五味保肝丸的主要药效成分为五味子，其主要有效成分为五味子甲素、五味子乙素。《中国药典》以五味子甲素含量作为五味子药材质量的评价指标[1],因此，以五味子甲素含量作为该制剂的制备工艺和质量控制指标是可行的。

　　五味子甲素为脂溶性成分,能溶于乙醇、甲醇,极易溶于苯、氯仿、乙醚。因此,在提取样品中一般都采用乙醚、氯仿、石油醚等有机溶剂超声提取后,挥干有机溶剂,残渣加甲醇定容来制备样品溶液。本实验采用氯仿超声提取，甲醇定容来制备样品溶液，五味子甲素加样回收率为97.64%,RSD=1.41%(n=6)，效果满意。

　　HTLC法测定五味子及其制剂中有效成分常用的流动相多用不同比例的甲醇-水[2～4]，也有用乙腈-水[5，6]，乙腈-甲醇-水[7]和甲醇-四氢呋喃-水[8]。对比试验结果表明，选用甲醇-水(80：20) ，供试品溶液相邻峰分离度能满足实验要求。

【参考文献】
  　　1 国家药典委员会.中国药典，2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005.

　　2 曹红,刘云.反相高效液相色谱法同时测定蚁肝丸中五味子甲素和五味子乙素的含量.药物分析杂志, 1997,17(4):238-240.

　　3 沙瑞国, 袁海龙, 李仙义, 等.高效液相色谱法测定肝泰胶囊中五味子甲素的含量.时珍国医国药,2001,12(5):398-399.

　　4 张大富,王玮.RP2HPLC色谱法测定降糖颗粒中五味子甲素、乙素的含量.湖南中医药导报, 2002,8(4):150-151.

　　5 傅黎春.降酶丸质量标准研究.广州医药,2000,31(2):78-79.

　　6 夏新华,邹龙.宝乐静颗粒剂质量标准的研究.中国实验方剂学杂志,2000,6(3):8-10.

　　7 崔兰贵, 王火, 朱铁梁, 等.HPLC法测定更年安片中五味子甲素和五味子乙素的含量.中草药,2001,32(5):409-411.

　　8 刘峰群, 贺承山, 李正明,等.高效液相色谱法同时测定肝得宁-Ⅱ号丸中五味子甲素和五味子乙素的含量.中国中药杂志,2000,25(3):157-158.