ING4 和HIF1α在人脑不同级别星形细胞瘤中表达的研究
作者：赵树鹏 牛光明 陶胜忠 张鹏远 宋乐 尹先印 苏芳忠
【摘要】 目的 研究ING4及HIF1α在星形细胞瘤中的表达，探讨它们在星形细胞瘤发生和发展中的作用。方法 采用免疫组化法检测45例星形细胞瘤标本及11例正常脑组织中ING4和HIF1α的表达。结果 ING4在正常脑组织和星形细胞瘤中的阳性表达率分别为100%、42.4%;Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级星形细胞瘤中的阳性表达率分别为58.3%、23.8%，差异均有统计学意义(P<0.05)。HIF1α在正常脑组织和星形细胞瘤中的阳性表达率分别为0、71.1%;在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级星形细胞瘤中的阳性表达率分别为54.2%、90.5%，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ING4和HIF1α基因的表达与星形细胞瘤分级有密切关系，在其发生和发展过程中起重要作用。
【关键词】 ING4;HIF1α;星形细胞瘤;免疫组化
【Abstract】 Objective To research the expressions of ING4 and HIF1α in astrocytoma, and explore their roles in genesis and development of astrocytoma. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expressions of ING4 and HIF1α in 45 cases of astrocytoma and 11 cases of normal brain tissues . Results The positive rates of the expression of ING4 in normal brain tissue and astrocytoma were 100%,42.4% respectively. The positive rates of the expression of ING4 in gradeⅠ～Ⅱand Ⅲ～Ⅳgrade astrocytoma were 58.3%, 23.8% respectively, the difference was significant(P<0.05).The positive rates of the expression of HIF1α in normal brain tissue and astrocytoma were 0,71.1% respectively. The positive rates of the expression of HIF1α in gradeⅠ～Ⅱand Ⅲ～Ⅳgrade astrocytoma were 54.2%,90.5% respectively, the difference was significant(P<0.05). Conclusion The expressions of ING4 and HIF1α genes have close relation to astrocytoma grade, which may play an important role in genesis and development of astrocytoma.
【Key words】 ING4; HIF1α; Astrocytoma; Immunohistochemistry
ING4基因是2003年发现的一种强的候选抑癌基因[1]，它通过抑制肿瘤血管增生、调控细胞增殖和凋亡及细胞的接触抑制等抑制肿瘤细胞的生长。缺氧诱导因子1α(HIF1α)是一种重要的转录因子,能促进肿瘤的血管生成，对肿瘤迅速增长起着重要的作用。本实验通过对45例星形细胞瘤标本中ING4和HIF1α蛋白检测，研究二者在星形细胞瘤发生和发展过程中的作用，为进一步揭示肿瘤的发病机制、诊断及治疗提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1.1 一般资料 45例人脑星形细胞瘤均取自郑州大学第二附属医院神经外科200901～200907手术切除标本。男25例，女20例，年龄2～77岁，平均(41.8±18.3)岁。所有病例均为原发病例，术前未经放化疗。标本切除后中性福尔马林液固定保存，进行脱水、透明、浸蜡、包埋,蜡块连续切片，厚约4 μm，HE染色后观察。按照2000年WHO中枢神经系统肿瘤分类标准[2]，其中Ⅰ级6例,Ⅱ级18例,Ⅲ级14例,Ⅳ级7例。把24例Ⅰ～Ⅱ级设为低度恶性实验组，21例Ⅲ～Ⅳ级设为高度恶性实验组。11例正常脑组织为对照组，取自脑外伤、脑出血、脑动静脉畸形病人内减压者。
1.2 方法 应用免疫组化法检测，厚约4 μm组织切片常规脱蜡，按SP盒说明进行。以PBS代替一抗作为阴性对照,兔抗人ING4多克隆抗体和兔抗人HIF1α单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司,SP试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司，所用两种兔抗人抗体的终浓度为1∶100。
1.3 染色结果判定 ING4阳性表达以细胞核和或胞浆内出现棕黄色颗粒为准, HIF1α表达于胞核或胞质，但主要是核表达,呈棕黄色。参考Hiroshi等[3]提到的方法,随机选10个高倍视野,依照细胞着色密度和着色强度半定量评分：(1)染色细胞百分比:未见染色为0分,≤25%细胞染色为1分,25%～50%细胞染色为2分,>50%细胞染色为3分;(2)依阳性细胞染色强度:未见染色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分，棕褐色为3分,上述两者之和的总得分来判定结果,>2分定义为阳性表达(+),≤2分定义为阴性表达(-)。
1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理,统计方法采用χ2检验。检验水准α=0.05。