氨金黄敏颗粒微生物限度检查方法的验证

【摘要】  目的  验证氨金黄敏颗粒的微生物限度检查方法是否适用于该供试品的检查。方法  细菌计数采用低速离心—培养基稀释法，霉菌及酵母菌计数按常规检查法，控制菌按常规检查法。结果  稀释剂对照组的菌回收率大于70%，试验组的菌回收率大于70%；阴性对照组未检出阴性对照菌，试验组检出阳性试验菌。结论  可以用该微生物限度检查法进行氨金黄敏颗粒的检查。
【关键词】  氨金黄敏颗粒  微生物限度检查法  验证
        氨金黄敏颗粒的微生物限度检查法本公司以前采用常规法，为了保证检验方法的科学性，现对本公司生产的氨金黄敏颗粒的微生物限度检查方法进行方法学验证，验证此方法是否适用于该供试品的检查。
        1  材料与仪器
        1.1 试验样品  药品名称：氨金黄敏颗粒，批号：090901、090902、090903，来源：公司自产。
        1.2 验证用仪器
        1.2.1 电热恒温干燥箱、电冰箱、电热恒温培养箱、恒温水浴锅、离心机、蒸汽灭菌锅、集菌仪等。
        1.2.2 玻璃器皿  锥形瓶、培养皿、量筒、试管、吸管等。
        1.3 验证用菌种  金黄色葡萄球菌；大肠埃希菌；枯草芽孢杆菌；白色念珠菌；黑曲霉。
        1.4 验证用培养基及稀释剂  营养琼脂培养基；玫瑰红钠琼脂培养基；胆盐乳糖培养基；营养肉汤培养基；改良马丁培养基；曙红亚甲蓝琼脂培养基。
        2  验证条件
        无菌室环境洁净度为10000级，局部洁净度为100级，净化消毒30min以上，供试品及灭菌的器具等经传递窗紫外杀菌灯照射30min置无菌室内，试验人员手消毒后穿无菌服进入操作间。
        3  方法与结果
        3.1 菌液制备  接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜斜面培养物接种于营养肉汤培养基中，于35℃培养18～24小时，分别取各菌种培养液1ml加入0.9%无菌氯化钠溶液9ml中，10倍依次稀释，金黄色葡萄球菌稀释至10-5，大肠埃希菌稀释至10-7，枯草芽孢杆菌稀释至10-5， 约为50～100cfu/ml,备用。
        接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养23～48小时，取培养液1ml加入0.9%无菌氯化钠溶液9ml中，10倍依次稀释至10-5，约为50～100cfu/ml,备用。
        取黑曲霉的新鲜斜面培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液5ml将孢子洗下，吸取此溶液1ml置一个无菌的比色管中，加0.9%无菌氯化钠溶液适量与标准比浊管进行比浊，取比浊后的菌悬液1ml加入0.9%无菌氯化钠溶液9ml中，10倍依次稀释至10-4，约为50～100cfu/ml，备用。