Synphilin1寡核苷酸对帕金森病酪氨酸羟化酶表达的影响
ENGELENDER等［4］于1999年在筛选αsynuclein蛋白相互作用物时发现，在LB中有一蛋白与αsynuclein蛋白相互作用，命名为Synphilin1。研究表明，PD病人αsynuclein蛋白在脑内异常聚集，并形成PD特征性的病理表现LB的主要成分，由此认为该蛋白在PD的发病机制中具有重要意义［6］。因此，研究与αsynuclein蛋白相互作用的蛋白synphilin1表达，对于研究PD的发病机制具有重要意义。本研究利用免疫组化法研究显示，PD组黑质Synphilin1阳性神经元数比正常组明显增多，提示6OHDA可能通过促进该蛋白的高表达而导致多巴胺神经元死亡，推测Synphilin1参与PD的发病机制，但具体作用机制有待深入的研究。
TH是DA合成的限速酶，TH的增加和减少直接影响着DA的含量。许多研究已经证明，PD时TH明显减少。本研究利用免疫组化法及Western blot定量检测显示，PD组TH的表达明显下降，与相关文献报道一致［7～9］；原位杂交检测显示TH mRNA的表达在PD组明显下降，说明TH在分子水平就有改变，进一步证明TH下降导致DA含量下降，从而导致PD症状的出现。然而，Synphilin1蛋白的高表达与TH是否有关，以及Synphilin1在6OHDA 诱导的PD发病机制中的作用是否与TH有关有待进一步研究。
反义寡核苷酸通过序列特异地与靶mRNA结合而抑制基因表达, 从而成为一类理想的、基因水平调控的治疗药物［10］。因具有较好的抗酶解活性,寡核苷酸硫代磷酸酯已成为目前最广泛研究的寡核苷酸类似物之一,并已应用于临床［11］。本文设计了正义、错义、反义3种寡核苷酸，注入大鼠右侧黑质，然后再在黑质内注入6OHDA，分别应用免疫组化、Western blot、原位杂交法检测TH阳性细胞数，结果显示，与PD组比较，反义组术侧黑质的TH阳性细胞数显著增多，蛋白显著增多，mRNA表达阳性细胞数也显著增多，而正义组、错义组与PD组比较差异无显著性，说明PD模型黑质Synphilin1高表达的抑制，可以提高TH蛋白的表达，进一步说明Synphilin1反义寡核苷酸能够抑制PD黑质神经元的损伤；另一方面说明了Synphilin1对PD的作用机制之一可能是通过减少TH的表达来实现的。由此我们认为它与αsynuclein相互作用共同参与了PD的发病机制。
【参考文献】
［1］SPILLANTINI M G, SCHMIDT M L, LEE V M, et al. αsynuclein in Lewy bodies［J］. Nature, 1997,388(6645):839840.
［2］POLYMEROPOLOS M H, LAVEDAN C, LEROY E, et al. Mutation in the alphasynuclein gene identified in families with Parkinsons disease［J］. Science, 1997,276 (5321):20452047.
［3］KRUGER R, KUHN W, MULLER T, et al. Ala 39 Pro mutation in the gene encoding αsynuclein in Parkinsons disease［J］. Nature Genet, 1998,18(2):106108.
［4］ENGELENDER S, KAMINSKY Z, GUO X, et al. Synphilin1 associates with alphasynuclein and promotes the formation of cytosolic inclusions［J］. Nat Genet, 1999, 22(1):110114.
［5］包新民，舒斯云. 大鼠脑立体定向图谱［M］. 北京：人民卫生出版社， 1991:4958.
［6］CHOI J Y, SUNG Y M, PARK H J, et al. Rapid purification and analysis of alphasynuclein proteins: Cterminal truncation promotes the conversion of alphasynuclein into a proteasesensitive form in Escherichia coli［J］. Biotechnol Appl Biochem, 2002,36(Pt 1):3340.
［7］彭湘闽，蒋雨平. 酪氨酸羟化酶与帕金森病［J］. 中国临床神经科学, 2002，10（1）：105108.
［8］徐岩，孙圣刚，曹学兵，等. 离体帕金森病动物模型制作的研究［J］. 脑与神经疾病杂志, 2002，10（4）：226227.
［9］李德鹏，徐群渊，张进禄. MPTP处理的小鼠和 6OHDA损毁的大鼠帕金森病模型病理变化的比较［J］. 中风与神经疾病杂志， 1999，16（2）：7982.
［10］CROOKE S T, BENNETT C F. Progress in antisense oligonucleotides therapeutics［J］. Annu Rev Pharmacol Toxicol, 1996,36(1 ):107129.
［11］AGRAWAL S. Antisense oligonucleotides: towards clinical trials［J］. Trends Biotech, 1996,14(10):376387.