青岛地区结核分支杆菌吡嗪酰胺耐药基因pncA的检测

来源：岁月联盟 作者：孙冰梅 于红 张克佳 时间：2015-10-12
    结核分支杆菌对PZA耐药性的产生，大量资料主要集中于对PZA酶的编码基因pncA的研究。目前认为pncA基因突变，使PZA酶活性降低或消失，不能将PZA转变为活性型，从而导致结核分支杆菌对PZA产生耐药。pncA基因全长561 bp。其突变分布比较广泛，可分布在启动子区域和结构基因的各个位置。SCORPIO等［4］对9株PZA耐药菌株进行SSCP分析，结果9株的SSCP带谱与药物敏感菌株有差异，特异性100%。SREEVATSAN等［5］检测了67株耐PZA分离株，72%有pncA基因突变。HOU等［6］应用SSCP和DNA测序分析35株PZA耐药菌株，32株有核苷酸的替代、插入和缺失，pncA突变率高达91.4%。国内吴雪琼等［7］利用PCRSSCP分析74株结核分支杆菌临床分离株的pncA基因，32株PZA敏感株SSCP未发现异常，22株PZA耐药株10株SSCP异常，pncA基因突变率为46%，进一步测序发现有58位和68位密码子改变。李洪敏等［8］检测了134例临床耐5种药物（PZA、链霉素、利福平、异烟肼、乙胺丁醇）分离株，对其中96株耐PZA分离株通过PCRSSCP技术进行分析，高耐药株有35株出现泳动变位，低耐药株有6株出现泳动变位，耐PZA分离株总突变率为42.7%。王巍等［9］应用PCRSSCP方法分析117例老年结核病人，pncA基因突变率为41.0%。
    本实验结果表明，27株PZA pncA基因扩增阳性的耐药分离株中，13株SSCP带谱存在泳动异常,pncA基因突变率为48.1%（13/27）。比上述国内文献结果略高，但显著低于国外文献结果。可见pncA基因的突变是本地区结核分支杆菌临床分离株耐PZA的主要分子机制之一。据报道，72%～94%的PZA耐药菌株中可见pncA基因的丢失、插入或替代［1，6，10］。pncA基因突变的特点不一，是否与地理区域有关，尚需进一步探讨。耐药菌株中有14株SSCP带谱与 H37Rv标准株相同，提示这14株耐药菌株的耐药性可能有其他的机制，如可能因为吡嗪酸在菌体内转移，也可能由于pncA基因的突变不足以引起单链DNA空间构象的改变［11，12］。PZA敏感菌株中有5株SSCP泳动异常，文献［13，14］也有类似报道，可能为一些沉寂突变，还需进一步用DNA测序来证明。
    BACTEC培养系统药敏结果与PCRSSCP分析结果在判断结核分支杆菌耐药性方面的差异无统计学意义，说明这两种方法在检测PZA耐药性方面结果一致。由于PCRSSCP分析方法2 d内即可获得测定结果，因此可用于快速检测结核分支杆菌PZA药敏试验，弥补了常规药敏试验的不足。但此方法特异性不高，在临床推广应用有一定局限性。
    总之，青岛地区结核分支杆菌临床分离株耐PZA的主要分子机制之一为pncA基因的突变。PCRSSCP技术可快速较准确地检测结核分支杆菌耐PZA基因pncA的突变，弥补了常规药敏试验的不足。
 
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