银杏叶提取物对老化红细胞膜ATP酶、SOD和MDA影响

   本研究设计的红细胞衰老模型显示，孵育（自然衰老）后红细胞的SOD、Na+，K+-ATPase和Ca2+，Mg2+-ATPase活性降低，说明随红细胞日龄的增长，红细胞内脂质过氧化作用逐渐加强，红细胞的抗氧化能力减低。这是因为随着循环中的红细胞逐渐衰老，抗氧化剂摄入不足，抗氧化酶类（如SOD 等）合成减少，活性减低。各种耗酶（包括醛缩酶、丙酮酸脱氢酶、ATPase等）无法再生，且其活性逐渐下降，使自由基清除率降低。而同时自由基生成并不减少甚至还增多，这样，自由基产生与清除失去平衡，脂质过氧化作用加剧，MDA 产生、增多，红细胞受损、老化加重，引起血管壁硬化及纤维性病变。同时，高铁血红蛋白浓度逐渐增加，Na+浓度升高，K+浓度降低，红细胞代谢和糖酵解反应降低，导致ATP生成不足，不能维持细胞内Ca2+稳定性而使细胞形态异常，机械脆性增加，红细胞膜流动性和变形性降低，使红细胞膜损伤，这又加快红细胞的老化，导致红细胞被吞噬细胞识别吞噬。
    银杏药用历史悠久,其对疾病的防治作用早在数千年前就已载入我国中药宝库之中，目前临床上所用的银杏叶提取物是其标准制剂EGb761，主要成分包括24%的黄酮甙及6%的萜内酯类等［1］，后者又包括银杏内酯A、B、C（约2.8%～3.4%）和白果内酯(约2.6%～3.2%)。基础研究的结果证实，银杏叶黄酮分子中含有还原性羟基（-OH）功能基团，可直接发挥抗氧化作用，它可直接捕捉和清除O2-、·OH等多种活性氧簇和过氧化氢、烷类自由基及脂类自由基等脂质过氧化物［5］。通过作为一种氢离子供体而阻断和终止自由基连锁反应链，从而阻止和抑制氧自由基反应和脂质过氧化反应病理性加剧，抑制LPO及其代谢产物MDA和共轭二烯等毒副物质的生成［6］。其抗氧化作用强于水溶性还原剂，而与脂溶性抗氧化剂维生素Ｅ（VitE）相当，可以消除细胞膜花生四烯酸代谢过程中产生的自由基。另外，它还参与调节和提高体内抗氧化酶的活性，降低全血黏度、血浆黏度等，增加红细胞表面的负电荷和红细胞间排斥力,促使红细胞解聚,从而降低血液黏度［7］。
    本文结果显示，加入EGb761保护的红细胞经过自然衰老过程后，与未加保护的自然衰老红细胞相比，其MDA 含量降低，SOD 和ATP 活力增高，说明EGb761能延缓自由基导致的红细胞的自然衰老过程。EGb761在自由基发生体系中能明显减少红细胞膜脂质过氧化物LPO 和MDA 生成和清除超氧阴离子自由基，从而减缓了对SOD 分子结构中巯基（-SH）和对DNA、ATPase 及其他酶的氧化、过氧化以及脂质过氧化损伤，从而保护机体内的抗氧化酶并提高其活性，加强细胞清除自由基的能力，提高细胞的防御功能。这样，在自由基介导的红细胞老化过程中，一方面由于银杏叶黄酮捕捉和清除了大量自由基，使抗氧化剂的消耗大为减少，保护了红细胞内的抗氧化剂和抗氧化酶的含量和活性；另一方面，EGb761又作为抗氧化剂，减少了过氧化作用对红细胞中过氧化应激敏感性的不饱和脂质和各种膜骨架蛋白的损伤，这些作用共同保护了红细胞膜结构完整性和功能稳定性。另外，EGb761还参与调节红细胞膜内外离子浓度，减少细胞内钙超载，从而保持红细胞形态和体积的恒定，维持细胞渗透压平衡。因而EGb761从多个方面延缓了红细胞的衰老过程。
 
【参考文献】
  ［1］ CORAN M H W, SIEGFRIED W, PETER A, et al. The in vivo neuromodulatory effects of the herbal medicine ginkgo biloba ［J］. PANS, 2001,98(21)：6577-6580.

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［3］ ALAOUI-YOOUSSEFI A, LAMPROGLOU I, PRIEUK, et al. Anticlastogenic effects of Ginkgo biloba extracts (EGb761) and some of its constituents in irradiated rats［J］. Mutation Research-Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis, 1999,445(1):99-104.

［4］ 王彩霞,李德新,王淑娟,等. 脾虚衰老大鼠红细胞膜ATP 酶活性及海马神经元PKC活性的变化［J］. 中医药学刊， 2005,23（8）：1662-1364.

［5］ MAITRA I, MARCOCCI L, DROY-LEFAIX M T, et al. Peroxyl radical savenging activity of ginkgo biloba extracts EGb761［J］. Biochem Pharmacol, 1995,49(11):1649.

［6］ CHOLTYSSEK H, DANMERAU W, WESSEL K, et al. Antioxidative activity of Ginkgolides against superoxide in an aprotic environment［J］. Chem Bilo Interact, 1997,106(3)：183.

［7］ GOHIL K, PACKER L. Bioflavonoid 2 rich botanical extracts show antioxidant and gene regulatory activity［J］. Ann N Acad Sci, 2002,957:70-77.