ELISA法测定粪样中性激素含量的应用前景
3.4激素提取液中存在干扰物质
通过稀释试验、平行试验或回收率试验可以判断提取液中是否存在干扰物质。在确认提取液中存在干扰物质后,需要选择最合适的激素提取方法来尽量消除这些干扰物质。在从粪便中提取性激素方面,最常用的提取溶剂是乙醇、甲醇和二氯甲烷。为了除去粪便中所含的脂类物质,李春旺等[17]、李淑玲等[18]等向提取液中加入石油醚进行萃取。此外,Shideler等(2001)还通过将粪样置于含有20%甲醇的磷酸缓冲液中,振荡整夜以提高对类固醇激素的提取率;Wasser等[6]也利用乙醇煮沸法或乙醇加热法(70 ℃)来提高类固醇激素的提取速率及提取量。
4应用ELISA测定粪便中性激素前景展望
目前ELISA在粪便临床化验中主要用于检测寄生虫以及细菌、真菌毒素,在性激素检测中主要用于测定血液、唾液或尿液中的激素含量[19-20]。随着酶免激素测定方法的逐步成熟,例如对双抗体夹心法的改良,ABS-ELISA法的普及应用,ELISA测定法的灵敏度和准确性已经提高到能够满足粪样激素测定的要求[21]。除此之外,随着物理、化学技术的进步,近年来又出现了许多更为先进的ELISA方法,如化学发光酶联免疫法,磁分离酶联免疫法[22],这些方法的应用使得酶免测定的操作手续和仪器设备更加简化,扩大了测量范围,减少了测量误差,加快了测定速度,有利于ELISA方法扩展到新的研究领域,包括应用到从粪样中提取性激素的研究活动中。
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