转基因油菜研究进展

　　1.2转化抗性基因
　　1.2.1转化抗除草剂基因。目前利用转基因技术已经培育出许多抗除草剂的油菜品种,主要利用的基因为Bar基因[4]、Pat基因和aroA基因[5]等。美国孟山托(Monsanto)公司从大肠杆菌的一个突变株中克隆出抗草甘膦的EPSP合成酶基因,并将其导入到油菜中,得到抗草甘膦除草剂的油菜;另一种是抗草丁膦除草剂基因,由加拿大等国育成,由抗性基因bar和pat共同整合抗草丁膦基因转入油菜,育成油菜新品种,并已进入田间试验[6]。Miki报道在Arabidopsis中克隆出Ahyclroxyacid合成酶基因(AHAS)突变体,并将其导入油菜,使油菜产生对咪唑基除草剂的抗性,钟蓉等[7]将抗除草剂溴苯腈基因bxn转入油菜获得抗溴苯腈转基因植株。
　　1.2.2转化抗病虫基因。油菜抗病虫转基因可分成抗虫、抗真菌和抗病毒3种基因。在抗虫方面,现在主要是利用从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)中分离的杀虫晶体蛋白(crylass)基因(即BT)通过农杆菌介导转化导入油菜。在抗真菌方面,主要是利用从1种豆类作物(Phaseolusvulgaris)或番茄中克隆出的几丁质酶(chitinase)基因和从大麦中克隆的草酸氧化酶(oxalateoxidase)基因。
　　2筛选标记
　　油菜较常用的筛选标记基因有新霉素磷酸转移酶基因(NPT IⅡ),潮霉素磷酸转移酶基因[8]和二氢叶酸还原酶基因[9]及bar基因、spt基因[10]等,它们分别介导对卡那霉素、潮霉素、氨基喋呤、除草剂、巴龙霉素的抗性。筛选剂最常用的是卡那霉素,应用卡那霉素筛选不乏成功的报道[8,10],但有的学者认为[9],卡那霉素对甘蓝型油菜有时效果很差,这可能与基因型有关。潮霉素、庆大霉素、新霉素应用成功的报道亦不少[11-12]。Schroder等(1994)研究了在甘蓝型油菜转化过程中4种选择标记基因(npt Ⅱ,aadA,bar,spt)在筛选过程中的效果,认为aadA基因(介导对链霉素和壮观霉素的抗性)在转化体的筛选过程中是最合适的。
　　3油菜转基因方法
　　在植物基因工程研究中,关键步骤之一是通过特定的方法将外源基因导入受体植物细胞内,使之发生定向的、永久性的遗传变异,即所谓的植物遗传转化。为了方便有效地将外源基因导入植物体内,人们不断地探索、发展新的植物遗传转化方法。目前应用到油菜转基因中的遗传转化方法主要有农杆菌介导转化法和外源基因直接导入法。