老年下呼吸道感染患者外周血细胞免疫表型分析

【摘要】  目的： 了解老年人下呼吸道感染时机体细胞免疫状态，为合理有效的干预提供一定的。方法: 采用流式细胞仪检测老年下呼吸道感染患者及健康老年组外周血淋巴细胞免疫表型（CD3，CD4，CD8，CD4/CD8比值，CD16，CD19），观察老年人下呼吸道感染时机体细胞免疫功能变化。结果: 老年健康组CD3、CD4 较对照组降低， CD4/CD8比值降低。老年感染组CD3、CD4、CD4/CD8比值、CD19较对照组及老年健康组均降低，CD8水平升高，差异均有显著性（P＜0.05）。结论: 老年人下呼吸道感染的发生、与机体的细胞免疫功能紊乱有关。对细胞免疫功能的监测，可作为评估老年个体免疫状态及对老年人下呼吸感染的预防、以及合理有效干预的参考。

【关键词】  呼吸道感染； 免疫，细胞； 老年人

    ［Abstract］ Objective:  To collect information of the cellular immunity of aged patients with lower respiratory infection, and so as to provide reference for reasonable and effective intervention of the disease. Methods: The contents of lymphocytes CD3, CD4, CD8, CD4/CD8, CD16, CD19 in peripheral blood of aged patients with lower respiratory tract infection (group LRI) and healthy old people (group HOP) were detected with flow cytometry. Results: The levels of CD3, CD4, and CD4/CD8 in the group HOP were lower than those of young control group (YCG). The levels of CD3, CD4, CD4/CD8, and CD19 in group LRI were lower than those of groups YCG and HOP. The level of CD8 was higher in group LRI than that in YCG. The difference was significant(P<0.05). Conclusions: The occurrence and the progress of lower respiratory tract infection in aged people are related to disorder of cellular immunity. Monitoring on the changes of immunological function is helpful to the evaluation of individual immunity condition of aged people, and can provide reference to the prevention, treatment and effective intervention of the disease.

    ［Key words］ respiratory tract infections; immunity,cellular; aged

    随着社会人口的老龄化，下呼吸道感染是严重危害老年人健康的常见感染性疾病。也是造成老年人死亡的重要原因之一。而老年人对感染性疾病的易感性和难治性始终成为困扰老年病治疗的一大难题。采用流式细胞仪对老年人群与老年下呼吸道感染患者外周血淋巴细胞表型进行分析，旨在了解老年人下呼吸道感染时机体细胞免疫功能的变化，为合理有效的干预提供一定的参考。

    1  对象与方法

    1.1  研究对象

    老年下呼吸道感染患者30例，年龄65~95岁，平均（76±8.3）岁，均为男性。为2005年11月~2007年12月在贵阳医学院综合病房住院的老年患者。健康老年组26例，男24例，女2例，年龄63~84岁，平均（68±5.8）岁，为同期健康体检者。健康志愿者30例作为正常对照组。所有人员均无肿瘤病史，未使用影响免疫功能的药物。

    1.2  诊断标准

    社区获得性肺炎（CAP）诊断符合中华医学会呼吸病学分会2006年修定的《社区获得性肺炎诊断和治疗指南》[1]；慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOAP）诊断符合中华医学会呼吸病学分会1997年制定的《COPD的诊治规范（草案）》[2]。

    1.3  检测方法 

    1.3.1  淋巴细胞免疫功能检测  静脉取血2 ml，以EDTAK2抗凝，立即送检，2 h内进行荧光抗体染色。所有荧光抗体为Simultest IMK-lymphocyte试剂（美国Becton Dickinson产品）。每份标本同时做6管即IgG1/Ig2a(对照管),CD45/CD14（对照管），CD3/CD19，CD3/CD4，CD3/CD8，CD3/CD16+56，分别加入相应荧光抗体20 μl和100 μl抗凝血于各管底部，彻底混合后，置室温暗处孵育20 min，然后加入Ⅸ溶血素（FACS溶解液）2 ml，迅速于混旋器上混匀，置室温处放置8 min，弃上清液，加入PBS 2 ml洗涤，并以1 000 r/min离心5 min，弃上清液，加入100 μl PBS混匀后立即上流式细胞仪检测。

    1.3.2  流式细胞仪检测  采用美国BD 公司流式细胞仪FACSCalibur,以三色荧光标准微球，启动FACSCom 软件，使仪器处于最佳工作状态。用 Simulset软件分析淋巴细胞CD3/CD19、CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD16+56、CD4/CD8。

    1.4  统计学处理

    采用SPSS软件包进行数据统计分析，各项测定值用x+s表示，组间比较采用单因素方差分析。

    2  结果

    2.1  T淋巴细胞亚群

    健康老年组CD3、CD4、CD4/CD8水平较正常对照组降低，差异有显著性（P＜0.05）。老年感染组CD3、CD4低于健康老年组,CD8水平高于正常对照组及健康老年组，CD4/CD8水平低于正常对照组。

    2.2  B淋巴细胞（CD19）

    CD19老年感染组低于正常对照组及健康老年组，CD16+56老年健康组及老年感染组均高于正常对照组，差异有显著性（P＜0.05）。各组间淋巴细胞结果见表1。表1  各组外周血淋巴细胞测定结果 (1)与对照组比较,P＜0.05；(2)P＜0.01。(3)与健康老年组比较，P＜0.05;(4)P＜0.01

    3  讨论

    研究表明，衰老现象是一个循序渐进的过程，生物个体随着时间的推移而发生的特征性的表型变化与疾病衰老不同。免疫系统功能随衰老而不断下降，而免疫衰老最突出表现之一是T淋巴细胞功能的减退[3]。本研究采用流式细胞术对老年下呼吸道感染患者及健康老年体检者外周血淋巴细胞免疫表型进行分析。本文观察的T细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD16均是T细胞重要的表面抗原标志（属T细胞辅助抗体），它们作为免疫效应细胞在直接杀伤靶细胞进行免疫调节等方面发挥着重要的功能。

    T淋巴细胞介导的细胞免疫在机体免疫方面起着核心作用。T细胞亚群中的CD3是总T细胞的表面标志，CD4是辅助T细胞（Th）和效应T细胞的表面标志，CD8是细胞毒T细胞和抑制T细胞（Ts）的表面标志,CD19是B淋巴细胞的表面标志。Th通过释放多种细胞因子辅助B细胞和效应T细胞活化，上调机体的免疫功能[4]。本组资料显示，老年人外周血CD3、CD4均有明显降低。CD4 /CD8比例降低，构成了老年人的细胞免疫表型，与报道相似[5]。  随着增龄， T细胞随胸腺细胞数的减少而减少，而CD8 T细胞的增加是T细胞受体表面基因多样性受损的变化，CD4/CD8比例下降直接反应了宿主T细胞亚群的紊乱状态。该现象造成T细胞的抗原识别谱变窄，对病原体及变异株的清除能力下降[4，5]。机体的免疫状态与感染防御能力是甚为相关的，而老年人免疫功能的降低也是老年人易患各种感染性疾病的重要原因[6]。老年肺炎组CD3、CD4、CD19的水平较健康老年组明显降低，提示老年人感染后会出现细胞免疫功能的更加低下。表明感染因素对机体的细胞免疫功能具有抑制作用，致细胞免疫应答反应迟缓，抗原提呈细胞功能降低，T细胞杀伤作用及产生细胞因子能力减弱，成为老年肺炎发病后病情重、易迁延、病死率高的原因之一[6]。CD16能识别NK细胞，NK细胞是无需抗原预先致敏就能杀伤肿瘤细胞的淋巴样细胞。本组资料中老年健康组、老年感染组与对照组差异有显著性，表明年龄及感染状态也可能影响机体细胞免疫中的非特异性成分。有可能是在机体效应T细胞减少、对外界病原微生物感染的免疫应答作用减弱时，非特异性免疫应答可能具有更重要的意义，借以维持机体免疫应答的相对稳定状态 。这一免疫反应的调节是极其精细、复杂的过程，其详细机制有待更深入的研究。

    综上所述，老年人下呼吸道感染的发生、与机体的细胞免疫功能紊乱有关。临床医生应重视老年人下呼吸道感染后T细胞免疫功能的变化，以作为评估老年个体免疫状态，并对老年人下呼吸感染的预防、以及对细胞免疫功能合理有效干预的。

【参考文献】
  [1]中华医学会呼吸病学分会.社区获得性肺炎诊断和治疗指南[J].中华结核和呼吸杂志，2006（10）：651-655.

[2]中华医学会呼吸病学分会 . COPD的诊治规范（草案）[J].中华结核和呼吸杂志，1997(20)：199-203.

[3]Globerson RB Effros. Aging of lymphocytes and lymphocytes in the aged[J]. Immunol Today,2000(10):515-521.

[4]Woodland DL.Cell-mediated immunity to respiratory virus infections [J]. Cure Opin Immunol,2003(4):430-435.

[5]韩辉，张静瑜，王宇虹. 免疫衰老的研究进展[J].国际免疫学杂志，2008（2）：125-129.

[6]于润江.高龄者难治性细菌性呼吸道感染的对策[J].中华结核和呼吸杂志，2001（6）：335-338.