艾迪注射液对裸鼠人胃癌移植瘤的抑瘤作用研究

                            作者：张金娟，温彩兰，张贵林

【摘要】  目的： 观察艾迪注射液对裸鼠人胃癌移植瘤的抑瘤作用。方法： 将人胃癌细胞BGC?823接种于裸鼠右腋皮下，建立荷瘤裸鼠模型；将荷瘤裸鼠随机分为5组：模型组、环磷酰胺组和艾迪注射液高、中、低剂量组，各组动物按相应药物和剂量给药，连续14 d；末次给药后处死动物，剥取瘤块，称重抑瘤率并作组织学观察。结果： 艾迪注射液高剂量组的抑瘤率为61.84%，光镜下可见大片状的坏死区。结论： 艾迪注射液对裸鼠人胃癌细胞BGC?823具有抑制作用。

【关键词】  艾迪注射液； 胃癌细胞BGC?823； 小鼠，裸

　　［Abstract］ Objective: To observe the anti?cancer effects of Aidi injection (Ad). Methods: Gastric cancer model of nude mice were established by transplanting human gastric cancer cell line (BGC?823) into hypoderm at mouse right armpit, and then the cancer?bearing mice were divided into 5 groups: model group, cyclophosphamide (CTX) group, and 3 Ad treated groups (high?dose, middle?dose, and low?dose groups). Physiologic saline, CTX, Ad were given to peritoneal cavity of mice of different groups respectively for 14 days. The mice were sacrificed by decapitation, and tumor tissues were weighted and observed with histological technique afterwards. Tumor growth inhibitory rates were calculated. Results: The tumor weighing showed that after administration, tumor growth in high?dose Ad group was apparently slower, with an inhibitory rate of 61.84% (P<0.05). Histochemistry analysis indicated the transplanted tumor was poorly differentiated gastric cancer, and necrosis could be observed within tumor tissues, especially in CTX and Ad treated groups. Conclusion: Ad has inhibitory effect on transplanted human gastric cancer in nude mice.

　　［Key words］ Aidi injection; gastric cancer cells (BGC?823); mice, nude
   
　　中医认为斑蝥具有攻毒蚀疽、破血散结的作用。斑蝥中的斑蝥素及其衍生物对多种肿瘤有肯定的效果[1]。艾迪注射液是以斑蝥为君药、配以人参、黄芪及刺五加等多位中药,经方法提取精制而成的一种广谱抗癌中药复方制剂。目前尚未见用艾迪注射液对人胃癌荷瘤裸鼠模型进行研究的相关报道，2007-2008年以接种人胃癌细胞BGC?823的荷瘤裸鼠为模型，研究艾迪注射液的抑瘤作用，为艾迪注射液临床应用提供实验依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  受试药物 

　　艾迪注射液，贵州益佰制药股份有限公司提供，批号20060807。每支10 ml，每1 ml相当于0.301 5 g生药。

　　1.1.2  瘤株 

　　人胃腺癌细胞BGC?823（低分化）由中科院上海细胞库提供。

　　1.1.3  受试动物

　　BALB/c(nμ/nμ)裸小鼠，SPF级，7周龄，上海斯莱克实验动物中心提供，合格证号SCXK(沪)2003-0003。裸鼠用带过滤罩的鼠盒饲养于清洁级动物室内的层流柜中，饮水、饲料、垫料均作无菌处理。动物室光照充足，温度26～28 ℃，相对湿度40%～60%。

　　1.1.4  其它材料 

　　环磷酰胺：江苏恒瑞医药股份有限公司，批号07083021；改良型RPMI1640培养基：海克隆生物化学制品(北京)有限公司，批号NSE0042；优级胎牛血清（天津市灏洋生物制品科技有限责任公司），DJ系列洁净动物饲养柜（空气层流柜，苏杭实验动物科技公司），超净工作台（苏州净化设备有限公司），CO2培养箱（ 2001HY?6003型，Thermo Forma公司），倒置显微镜（CK40型，日本Olympus公司）。

　　1.2 方法

　　1.2.1  荷瘤裸鼠模型 

　　将人胃癌细胞BGC?823于体积分数10%灭活胎牛血清的RPMI1640培养液中 (青霉素100 U/ml，链霉素100 mg/L)，在37 ℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养。收集对数生长期细胞，用0.4%台盼蓝染色、检测细胞活力高于95%，调整成浓度为1.0×107/ml的细胞悬液。无菌条件下将细胞悬液以0.2 ml/只接种于裸鼠右腋皮下，继续饲养2周，建立荷瘤裸鼠模型。

　　1.2.2 分组与给药 

　　将荷瘤裸鼠按瘤块大小随机分为：模型组（等容积生理盐水）、环磷酰胺组（20 mg/kg）、艾迪注射液高剂量（9.45 g/kg）组、艾迪注射液中剂量（4.72 g/kg）组和艾迪注射液低剂量（2.36 g/kg）组，每组6只。环磷酰胺隔日腹腔注射1次，其余各组均按相应药物和剂量每天腹腔注射1次，连续14 d。

　　1.2.3  测定抑瘤率 

　　末次给药后次日，脱颈椎处死动物，剖取瘤体组织，天平称重瘤块，按公式[2]计算抑瘤率。抑瘤率=（模型组平均瘤重-实验组平均瘤重）/模型组平均瘤重×100%

　　1.2.4  形态学观察 

　　取部分剥离的瘤组织以10%中性福尔马林固定，石蜡包埋、制成4 μm厚的切片、HE染色、光镜下观察瘤组织细胞形态。

　　1.3  统计学方法 

　　实验数据以（x±s）表示，组间比较采用t检验。

       2  结果

　　2.1  抑瘤率
   
　　各给药组移植瘤平均重量均低于模型组，其中环磷酰胺组和艾迪注射液高剂量组瘤重与模型组比较，差异显著（P＜0.05），抑瘤率分别为65.46%和61.84%。见表1。表1  各组荷瘤裸鼠体重和抑瘤率（略）注：与模型组比较，(1)P＜0.05。

　　2.2  移植瘤组织形态学观察

    各组裸鼠瘤组织病理类型均为低分化胃腺癌。细胞为圆形、椭圆形，胞质丰富，核大畸形，核仁深染，核分裂相多见。模型组罕见坏死，艾迪注射液中、低剂量组可见小片状坏死区，环磷酰胺组、艾迪注射液高剂量组均可见大片状的坏死区。见图1A～E。3  讨论
    　　
　　裸鼠由于染色体的第11对等位基因突变，失去正常胸腺，属于免疫缺陷动物，将裸鼠用于肿瘤移植实验，无需对动物作特殊的前处理，异种肿瘤移植成功率相当高。移植于裸鼠体内的人类肿瘤，可保持其原有的组织形态及生化功能，并保持特有的染色体组型和对抗肿瘤药物原有的敏感性。一般认为，人体肿瘤异种移植于裸鼠的模型对抗癌药的反应与临床有较好的相关性，对临床疗效有重要的价值 [3]。同时，皮下移植瘤具有不与皮肤及皮下组织粘连，极易分离，便于观察、测量和进行注：“↑”所指为坏死区。

　　活体检查的优点。因此，实验采用与临床更为接近的人胃癌细胞BGC?823裸鼠皮下移植模型，观察艾迪注射液的抗癌作用。组织形态学检查结果显示，各组裸鼠肿瘤组织病理类型均为低分化胃腺癌，表明人胃癌细胞BGC?823的荷瘤裸鼠模型复制成功。连续给药14天，艾迪注射液高剂量组的抑瘤率为61.84％，大于30%，根据实体瘤疗效评价标准[3]，可判定为对裸鼠皮下生长的人胃癌细胞BGC?823移植瘤有一定作用。
   
　　艾迪注射液为中药复方制剂，在其组方中，斑蝥具有攻毒蚀疽、破血散结之功效，医学认为斑蝥的主要有效成分为班蝥素，斑蝥素具有明确的抗肿瘤作用。人参有大补元气、生津止渴、补脾益肺，能增强机体免疫力；人参中含有的多种皂甙、人参多糖及人参挥发油具有抗肿瘤作用。黄芪有补气固表、止汗脱毒、生肌、利尿、退肿之功效；刺五加益气健脾，补肾安神，两者均能增加人体免疫力。艾迪注射液在临床上用于治疗原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤及妇科恶性肿瘤，具有直接杀肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡[4，5]、抑制肿瘤血管生成[6]、增强机体免疫力等作用[7]。临床上艾迪注射液用于放、化疗的辅助治疗可以抑制肿瘤进展，降低毒副反应，防治放、化疗所致的骨髓抑制，提高机体的免疫功能和提高生活质量[8，9]。本研究表明，艾迪注射液对裸鼠皮下的人胃癌移植瘤有治疗作用，为艾迪注射液用于胃癌的临床治疗提供了依据。但其对胃癌的抑制作用是否从多靶点、多层次、多途径发挥作用，还有待进一步研究。
 

【参考】
  　　[1]江励华，王明艳.斑蝥的研究进展.医药导报[J].2004 (6):385-386.

　　[2]杨孟祥，张彬，李光耀,等.复方消核丸对肿瘤小鼠模型抑瘤作用的研究[J].山东中医杂志,2009(3):194-197.

　　[3]徐叔云.药理实验方法学[M].3版.人民卫生出版社,2001:1757-1758，203-204，1762-1763.

　　[4]唐斓，曾凡波，王涛，等.艾迪注射液抑制肿瘤细胞生长及诱导肿瘤细胞凋亡的研究[J].药师,2006(9):198-200.

　　[5]沈括,冯建明,刘昕.艾迪注射液对K562/ADM细胞体外生长和增殖周期的实验研究[J].中华实用中西医杂志,2005(18):1857-1860.

　　[6]丁杰,廖国庆,王万川,等.艾迪对结直肠癌血管生成抑制的临床研究[J].肿瘤,2007(27):142-146.

　　[7]唐斓,曾凡波,吴明珲,等.艾迪注射液对荷H22瘤小鼠免疫作用的影响[J]。医药导报，2006（25）：104-106.

　　[8]荣晓凤，姚蔚瑜.艾迪注射液对晚期肿瘤患者免疫功能的影响[J].中国中医急症,2007(16):161-162.

　　[9]贾淑薇,贾辉,唐焕新,等.艾迪注射液在恶性肿瘤放、化疗中增效减毒作用的临床研究[J].现代肿瘤医学,2007(15):854-856.