丹参联合胞二磷胆碱治疗大鼠脑挫伤的机理研究
【关键词】 丹参胞二磷胆碱；大鼠；脑挫伤
【ABSTRACT】 Objective: To investigate the morphological changes of brain contusion treated by Salvia miltiorrhiza.methods:The Feeneys falling body injury method was used to make 45 wistar rats into brain contusion model. Then the rats were randomly divided into two groups, i.e. experimental group including 30 animals were treated with Salvia miltiorrhiza and Cytidine diphosphale choline through abdominal injection,15rats without any treatment were taken as control group. After 2d,14d, and 28d of brain contusion, the morphological change was observed at the injured area by LM and EM and the contents of SOD, MDA in serum were observed.Results:The morphological observation revealed that the lesioned neuron restored faster and scar tissue formated early in the experimental group. The concentration of SOD in serum was significantly higher in the experimental group than that in the control group (P<005). the concentration of MDA was lower in the experimental group than that in the control group.Conclusion: It might promote the restoration of brain contusion to treat the rats with Salvia miltiorrhiza and Cytidine diphosphale choline.
【KEY WORDS 】 Brain contusion;Salvia miltiorrhiza;Rat
脑损伤区由于缺血、缺氧导致神经元和胶质细胞的损伤，在早期损伤呈进行性加重，至3~7d后才被控制［1,2］，为了及早改善机体微循环，在脑挫伤早期是否应用丹参液，是值得探讨的。有人在脑损伤早期应用丹参注射液收到了良好的效果［4,5］；为了探讨脑挫伤应用丹参的机理，我们复制大鼠脑挫伤模型，在伤后连续注射丹参液，除观察伤灶区变化外，还检测了脑中钙离子（Ca2+）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷光甘肽过氧化物酶（GSHPX）含量，将治疗组与模型组进行了比较，以阐明丹参作用的可能机理。
1 材料和方法
取wistar大鼠72只，体重180~250g，雌雄不拘，分笼喂养。随机分为正常对照组、模型组和治疗组。采用Feeney氏自由落体法复制脑挫伤模型。治疗组于伤后即可肌注丹参液（10/kg）和胞二磷胆碱钠注射液（225mg/kg），2次/d。于术后24h和7d，分别断头处死大鼠，取脑及血液，制作石蜡切片，光学显微镜下观察挫伤脑皮质的形态学变化。取脑皮质制成悬液，置721分光光度计，检测脑皮质中SOD、MDA、GSHPX和Ca2+含量，试剂盒均由南京建成生物工程研究所生产。数据经统计学处理（t检验）。
2 结果
伤后24h，光镜下可见损伤区脑皮质形成明显的出血灶直径约03cm，伤灶中心区有积血神经元于24h后消失，病灶周边区仍存在水肿的神经元、神经胶质细胞和轴、树突。48~72h神经组织损伤呈进行性加重，治疗组则未见加重表现。模型组7~14d时神经元水肿减轻，而治疗组积血大部分被吸收，神经元水肿基本消失，神经胶质细胞数目明显增多。伤后24h检测脑组织悬液中GSHPX活力，正常组为16723 ±1611，模型组为13215 ±1361，治疗组为15056 ±1819，治疗组略高于模型组，各组间差异无显著性。脑Ca2+、SOD、MDA含量见表1、2。
表1 脑损伤后脑钙含量的变化（略）
注：△与正常对照组比较P<005 *与模型组比较P<005
表2 各组大鼠脑组织伤后SOD、MDA含量（略）
注：△与正常组比较有显著性差异P<005 *与模型组比较有显著性差异P<005
3 讨论
重物打击致脑组织挫裂伤，使局部小血管破裂出血，形成小的出血灶，在灶周区小血管痉挛，致微循环受阻，血液粘稠度增高，由于脑组织缺血、缺氧加重，使组织细胞内、外众多酶活性下降，能量代谢障碍，尤其是细胞内线粒体呼吸链中传递障碍，能量耗解，Na+K+ATP酶活性下降，导致细胞内H2O、Na+积聚，形成细胞水肿，电镜下可见神经元高度水肿，胞质电子密度低，细胞器减少，线粒体水肿或质膜断裂。由于自由基清除受阻和脂质过氧化产物MDA增多，使细胞损伤加重。同时，质膜中脂质过氧化造成膜结合酶、受体和离子微环境变化、形成新的离子通道，引起Ca2+内流，由于钙超载，加重了细胞损伤。如果及早改善脑微循环，缓解脑水肿，抗自由基和纠正钙超载，将有利于挫裂伤的。根据前人实验表明，胞二磷胆碱（CDPC）是核苷酸衍生物，其钠盐具有辅酶作用，对改善脑细胞代谢、促进神经细胞功能恢复，有重要作用。丹参主要含丹参素（C5H10O5）兼有酮、醇和维生素E等［6~9］。目前实验性研究已表明丹参注射液已为“活血化淤”的重要中药制剂，在临床已广泛用于心血管治疗，在脑血管病的治疗中也有应用，并已收到良好效果。认为其机理为丹参能够扩张小血管和促进纤维蛋白原溶解，使红细胞解聚，从而降低血液粘稠度，改善微循环，减轻组织缺血缺氧对细胞造成的损伤。本实验中亦看到２~７d治疗组病灶周区微血管充盈度及血管密度均优于模型组。丹参具有很强的抗自由基能力，不仅能够清除超氧阴离子（O-２），而且能够提高６ketoPGHI2水平和ＳＯＤ活性，抑制ＭＤA生成，本实验中２４h、７d均见治疗组ＳＯＤ活性高于模型组，ＭＤＡ低于模型组（Ｐ<005）。同时，治疗组脑组织中谷光甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）活性也略高于模型组。ＧＳＨＰＸ也有清除自由基，保护细胞膜作用。本实验观察到治疗组脑组织Ca2+聚集明显减轻，可能与丹参的钙离子拮抗作用有关［4~6］。神经元内钙超载，可能导致膜脂质过氧化反应及Ca2+调蛋白酶类，核苷酸环化酶等功能失调、加重细胞代谢紊乱［8,9］，丹参则能减轻Ca2+聚集造成的细胞内外离子失衡，保护细胞膜结构。总之，本实验通过测定脑组织ＳＯＤ、ＭＤＡ、ＧＳＨＰＸ和Ca2+含量变化，探讨了丹参联合胞二磷胆碱治疗脑挫裂伤的机理，欲为开辟中西结合治疗脑挫伤的新途径提供资料。
参考
1 张辉，陈守斌.局灶性脑挫裂伤对脑血管和神经元超微结构的影响[J].张家口医学院学报,1998,15（2）:1315
2 Siesjo BK.Pathophysiology and treatmant of focal cerebral is chemia[J]. J Neurosurg，1992,77:169180
3 Holmni S,Mathiesen T,Shetye J,et al. Intracerebral inflammatory response to experimental brain contusion[J].Acta Neurlchir,1995,132(1):110119
4 张剑宁,易声禹,章翔,等.脑损伤后血液流变学改变及丹参治疗作用[J].中华神经外科杂志，1995,11(1):2628
5 骆郁林,鲁小耘,史雪川,等.复方丹参治疗新生儿缺氧性脑病（HIE）疗效观察[J].广州医药，1997,28(5):1112
6 Vink R,Health DL,Mclatosh TK.Acute and prolonged alterations in brain free magnesium fllowing fluid percussioninduced brain trauma in rats[J].J Neurochem,1996,66(6):24772498
7 季宇彬主编.中药活血化淤有效成分[M].第1版.黑龙江:黑龙江科技出版社，1999.9498
8 江苏医学院编.丹参成分[A].中药大辞典(上册)[M].第1版.上海:上海人民出版社,1975.479482
9 郑虎占,董泽宏,余靖主编.中药研究与应用（第二卷）[M].第1版.北京：学苑出版社， 1997.10191193
