旋毛虫感染小鼠肌组织的病理研究
作者：刘向东 唐红炜 王淑强
【摘要】 目的：探讨旋毛虫感染小鼠肌组织的病理变化。方法：取40只昆明小鼠，用灌胃法建立轻度（L组）、重度（H组）旋毛虫感染动物模型，观察其膈肌组织的病理变化。结果：第1周时可见肌纤维变性、水肿、肌膜破坏等病理变化；肌幼虫囊包周围有较多的炎症细胞浸润。第5周时发生玻璃样变性，出现透明带。第7周时，幼虫及囊包周围开始有钙盐沉积。L组、H组两组除感染第13周外，其余时间病理变化没有观察到明显的差异。结论:感染旋毛虫后，肌组织出现变性、水肿、炎细胞浸润及幼虫囊包的钙化等病理变化，为旋毛虫病的病理检测提供有用的基础资料。
【关键词】 旋毛虫;小鼠;病理组织学
【ABSTRACT】 Objective: To study the pathological changes on muscular tissue in mice infected with Trichinella spiralis. Methods:The models of light trichinization (Group L) and heavy trichinization(Group H) were established by gavage, and also the histological changes of diaphragm were observed. Results: In the first week the pathological changes of muscle fiber, degeneration, dropsy, the destruction of muscle membrane and so on can be observed; there was more inflammatory infiltration around the muscle larvae cysts. In the fifth week hyaline degeneration occured and pellucid zone appeared. There was sedimentation of calcium salts around the larvae and cysts in the seventh week. There was no obvious difference in histological change in Group L and Group H except in the thirteenth week. Conclusion: The pathological changes of degeneration, dropsy, inflammatory infiltration, calcification of the cysts and so on in the muscular tissue after infection of trichinization will provide the pathological conduction of trichinellosis with the useful basic data.
【KEY WORDS】 Trichinella spiralis；Mice；Histopathology
旋毛虫病（Trichinosis）是由旋毛形线虫(Trichinella spiralis)感染引起的人兽共患病。由于旋毛虫幼虫在肌细胞中寄生，虫体周围出现炎症细胞浸润，纤维组织增生[1]，引起肌细胞变性、肿胀、横纹消失及坏死、崩解，是一种严重危害人体健康的寄生虫病。人体感染与饮食习惯密切相关[2]，屡有集体进食生野猪肉引起旋毛虫病暴发流行和食风干生熊肉引起旋毛虫病的报道[3～5]。近年来随着烧、烤、涮等饮食方式的普及，旋毛虫病发病率有逐年上升的趋势。本项研究建立旋毛虫轻度、重度感染小鼠的动物模型，对感染小鼠膈肌中虫体周围的组织病变化进行了观察，试图探讨不同感染程度所致病理学变化之间的关系。
1 材料与方法
1.1 旋毛虫虫种 引自天津医科大学寄生虫学教研室。
1.2 实验动物 昆明远交系小白鼠，＞10周龄，体重（20±2）g，雌雄并用，由张家口市制药总厂动物管理中心提供。动物自由摄食河北北方学院动物室生产的颗粒饲料，饮用普通自来水。
1.3 仪器设备
石蜡切片机 1512 (德国)
自动脱水机 TS?12E (湖北孝感仪器厂)
生物显微标本自动染色机 ZRJ?A (东北光学仪器厂)
欧林巴斯自动显微照相系统 PM?10ADS （日本欧林巴斯公司）
1.4 旋毛虫肌肉幼虫的提取 取感染旋毛虫小鼠，剖杀、剥皮并除去内脏，取其横纹肌肉，用剪刀剪碎，置三角烧瓶内，按每克肉25ml的比例加入人工消化液[按0.2%（W/V）加入胃蛋白酶（活性1∶30000），按0.7%加入浓盐酸]，37℃消化10～18h，将消化后的含肌肉碎屑混悬液，用75目筛过滤，弃上清，取沉淀，再用生理盐水反复洗涤幼虫，最后用5% 明胶将幼虫悬浮。最后用抽样计数法，算得幼虫总数,使用前用5% 明胶调至1000条幼虫/ml。
1.5 动物分组和组织病理学观察
1.5.1 将实验动物分为3组:
正常对照组（N组）20只小鼠；
轻度感染组（L组）20只；
重度感染组（H组）20只；
1.5.2 动物感染 用灌胃法给L组喂饲稀释一倍后的混悬液0.4ml/只（取原混悬液0.2 ml+5%的明胶0.2ml）, 含旋毛虫幼虫200条；给H组喂饲混悬液0.4ml/只,含旋毛虫幼虫400条；N组则仅给予5%的明胶0.4ml/只。三组饲养条件相同。
1.5.3 组织病理学观察 于旋毛虫感染后第1周、3周、5周、7周、9周、11周、13周、15周分别从N、L、H三组中每组随机取一只雄鼠，处死，解剖取其膈肌，放入10%中性福尔马林中固定，石蜡包埋，连续切片，厚度为5μm。切片用HE(苏木精—伊红)染色，镜检观察，并拍照。
2 结果 见表1
正常肌组织肌纤维正常，横纹较清晰，肌浆均匀一致，肌膜细胞清晰可见（见图1）。L组、H组两组感染第1周出现部分肌纤维肌浆凝固，横纹消失，肌纤维断裂、溶解、坏死，囊包内有1～2条幼虫，幼虫周围有多量炎细胞浸润，以嗜酸性粒细胞为主（见图2）。从感染后第3周 开始，炎症反应减轻（见图3）。从第5周开始发生玻璃样变性，出现透明带（见图4）。从第7周开始，幼虫及囊包基质着色发蓝，开始有钙盐沉积（见图5）。从细胞浸润的成分来看，本项研究中感染第3周以淋巴细胞和单核细胞为主。由病理结果可见（见图6、7），感染第13周时，L组炎症反应逐渐减退；而H组周围反应特别明显，炎细胞周围有纤维结缔组织，囊包周围的炎细胞浸润带被增生的纤维母细胞包绕。除13周外，其余时间组织学变化没有观察到明显的差异。
图1 正常对照组膈肌的组织切片观察(3.3×10)图2 轻度感染组第1周膈肌的组织切片观察(3.3×10)图3 轻度感染组第3周膈肌的组织切片观察(3.3×10)图4 重度感染组第5周膈肌的组织切片观察(3.3×20)图5 轻度感染组第7周膈肌的组织切片观察(3.3×20)图6 轻度感染组第13周膈肌的组织切片观察(3.3×20)图7 重度感染组第13周膈肌的组织切片观察(3.3×20)3 讨论
据报道, 幼虫侵入横纹肌后,横纹肌的主要病理变化依次有：①肌纤维变性和肌浆溶解；②幼虫周围出现大量炎细胞浸润，并引起肉芽肿反应；③囊包形成；④囊包从两端开始钙化，继而涉及整个囊包[6]。本次实验中，从感染后第3周 开始，炎症反应减轻，这是因为在小鼠体内于感染的第20～21d开始形成囊包，第5周开始发生玻璃样变性，出现透明带，第7周时，幼虫及囊包基质开始有钙盐沉积，这与上述文献报道基本一致。
据朱兴全报道，旋毛虫感染在形成包囊内壁的过程开始后，囊包外周的炎性细胞浸润现象则逐渐减退。由于虫体的毒害，肌细胞的再生、修复过程不能实现，已经变得扁平、菲薄的成肌细胞核进一步消失，发生透明变性。钙化过程一般从一端或两端开始，可首先见到包囊壁四周或中部有细小的钙盐颗粒沉着[7]。钙化包囊中的幼虫也可存活很长时间，包囊中的幼虫一旦死亡也很快钙化。
虫体周围肌细胞出现的炎症细胞浸润，以淋巴细胞、大单核细胞及嗜酸粒细胞为主[8]。而本实验结果表明：旋毛虫感染早期（感染第1周）虫体周围以嗜酸性粒细胞为主，感染第3周就出现以淋巴细胞和单核细胞为主的炎细胞浸润。
L组、H组两组，除感染第13周外，其余时间组织学变化没有观察到明显的差异，提示不同感染度与组织病变化之间关联性不明显，至于其中机制有待进一步实验研究。
【文献】
1 詹希美主编.人体寄生虫学/[M/].第1版.北京：人民卫生出版社,2001.216?217
2 王崇功.国内近十年来旋毛虫病的临床研究/[J/].江苏医药，1998，24（6）：416
3 叶萍，黄建化，查正坤,等.一起因食野猪肉引起人体旋毛虫病暴发/[J/].人兽共患病杂志，2003，19（2）：12
4 林玉兰.食风干生熊肉引起旋毛虫病1例/[J/].西藏医药杂志，1999，20（1）：54
5 次仁，斯塔，王洪举,等.西藏自治区米林县一起旋毛虫病的爆发/[J/].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2003，21（1）：60
6 吴中兴，郑葵阳主编.实用寄生虫病学/[M/].第1版.南京：江苏技术出版社,2003.33
7 朱兴全主编.旋毛虫病/[M/].第1版.郑州：河南科学技术出版社,1993.229
8 陈兴保，吴观陵，孙新,等.寄生虫病学/[M/].第1版.北京：人民军医出版社,2002.417
