DNS法测定黄柏中总糖的含量

来源:岁月联盟 作者: 时间:2010-07-13

                作者:李卫彬,阳文辉,黄锁义  

【摘要】  目的 探讨黄柏中总糖的提取及其影响因素。方法 利用6mol/L盐酸水解提取黄柏中总糖,用DNS法确定最佳条件及进行含量测定。结果 最佳条件为:检测波长480nm,显色剂用量3ml,沸水浴中保持5min,黄柏中总糖含量为11.18%,RSD为1.14%(n=5)。结论 本法测定黄柏中总糖,精密度、灵敏度都能符合食品分析的要求,分析结果可靠。

【关键词】  黄柏;DNS法;总糖

  Abstract:  Objective  To investigate the optimized procedures for extracting total sugar from phelloodendron and the affacting factors.  Methods  The total sugar was extracted with 6mol/L hydrochloric acid as solvent from phellodentron, 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) colorimetry was used to determine the optimized condition and the quantity was also detected.  Results  The optimized procedures were: 480nm detecting wave length, 3ml color-developing agent, sunk in the boiling water for 5 minutes. The quantity of total sugar extracted from phellodendron was 11.18%, RSD was 1.14% (n=5).  Conclusion  Using this method to determine the total sugar extracted from phellodendron, the results can reach to the standards of precision and sensitivity in food analysis.  

  Key words:  phellodendron; 3,5-dinitrosalicyclic acid colorimetry; total sugar

    黄柏是芸香科植物黄皮树(Phellodendron Chinense Schneid)及黄柏树(P. Amurense Rupr.)除去栓皮的干燥树皮,前者习称“川黄柏”,后者习称“关黄柏”[1]。本品始载于《神农本草经》,原名“檗术”,列上品。“主五脏肠胃中结热、黄疽、肠痔、止泻痢、女子漏下赤白、阴伤蚀疮”,历来作为清热燥湿、泻火解毒、退虚热的常用中药[2]。黄柏产地主要分布陕西、甘肃、湖北、广西、四川、贵州、云南等省区,具有清热解毒,清下焦湿热、泻火,治湿热引起的痢疾、黄疸、白带、痔疮便血,阴虚火旺引起的骨蒸劳热,目赤耳鸣、盗汗、口舌生疮等功效,并有抑菌等作用。黄柏总糖的测定未见报道,由于3'5-二硝基水杨酸(DNS)比色法(简称DNS法)具有准确性高、重现性好、尤其适用于大批量样品的测定等特点,为此,我们文献[3]测定黄柏中总糖的含量,为黄柏的综合利用提供参考,现报道如下。

  1  仪器、试剂与试药

  1.1 仪器 

  FA1104型分析天平(上海天平仪器厂),8X-4-10型箱式电阻炉(嘉兴新胜电器厂),722型可见分光光度计(上海分析仪器总厂),766型远红外烘箱(上海跃进医疗器械厂)、HH-S型电热恒温水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂)。

  1.2  试剂  

  1.2.1  DNS试剂的配制 

  称取6.5g DNS溶于少量水中,移入1000ml容量瓶中,加2mol/L氢氧化钠溶液(NaOH)325ml,再加入45g丙三醇,摇匀,定容至1000ml。

  1.2.2  葡萄糖对照品液的配制 

  精密称定于105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg,置100ml量瓶中,溶解并稀释至刻度,混匀得1mg/ml葡萄糖对照品溶液。所用其他试剂均为分析纯。

  1.2.3  制备的黄柏 

  采自广西百色市,临用前将其在50℃~60℃下烘至恒重后,粉碎,过80目筛放干燥器中备用。

  2  方法

  2.1 总糖供试品溶液的制备[4,5] 

  准确称取黄柏干燥样品粉末1g,放入50ml试管中,加入10ml 6mol/L HCl溶液和15ml蒸馏水,混匀,在沸水中加热30min后,用碘化钾—碘溶液检查水解程度。待水解完全后,冷却,加入酚酞指示剂,以10%NaOH溶液中和至溶液呈微红色,滤过并定容至100ml,备用。

  2.2  最大吸收波长的确定 

  分别取样品液和对照品液各1ml加入25ml容量瓶中,加水至各容量瓶中液体的总体积为2.5ml,再精密加入3ml DNS试剂,混匀,于沸水浴中煮沸5min,取出立即冷却,加水至刻度,摇匀。以2.5ml蒸馏水替代标准液作试剂空白。在722型可见分光光度计上于400~600nm处扫描,结果对照品与样品均在480nm处有最大吸收,故确定480nm为测定波长。

  2.3  标准曲线的制作 

  分别精密加入0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml葡萄糖对照品溶液,加水至各容量瓶中液体的总体积为2.5ml,再精密加入3ml DNS试剂,混匀,于沸水浴中煮沸5min,取出立即冷却,加水至刻度,摇匀。以蒸馏水作试剂空白,在480nm处测定吸光度。

  3  结果

  3.1 吸光度测定结果 

  根据表1得吸光度和质量浓度的回归方程:A=0.2391C-0.02486,r=0.9991。结果表明葡萄糖在0.2~1.4mg/ml与吸光度呈良好的线性关系。 表1  722型可见分光光度计测定吸光度(略)

  3.2  精密度试验 

  取同一总糖供试品溶液0.2ml,按2.2项下同法操作,连续测定5次吸光度,RSD为0.420%,表明精密度良好,结果见表2。表2  精密度试验结果(略)

  3.3  重现性试验 

  取同一总糖供试品溶液5份,分别按2.2项下操作,连续测定5次吸光度,RSD为4.13%,表明本法重现性良好,结果见表3。表3  重现性试验结果(略)

  3.4  稳定性试验 

  分别精密吸取总糖供试品溶液0.2ml,分别在0、10、20、30、60 min测定。结果,总糖供试品溶液测得质量分数的RSD分别为3.73%(n=5)。表明总糖供试品溶液在60min内是稳定的,结果见表4。表4  稳定性试验结果(略)

  3.5  加样回收试验 

  精密吸取已知量的黄柏干燥样品粉末1g,平分5份,分别精密添加已知质量浓度葡萄糖对照品适量。按总糖样品液的制备方法分别制备样品液,按标准曲线项下方法测定,回收率,结果总糖样品液平均回收率为102.7%,RSD为0.36%。

  3.6  样品测定 

  精密吸取各供试样品溶液0.2ml置25ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度。吸取该样品1ml置10ml容量瓶中,其余操作按2.2项下同法操作,测定吸光度,根据回归方程计算供试品溶液中总糖含量为11.18%,RSD为1.14%(n=5)。

  4  讨论
      
  在碱性溶液中,DNS被还原糖还原生成的氨基化合物在480nm波长处具有最大吸收,DNS法测定黄柏中总糖的最佳条件为:检测波长480nm,显色剂用量3.0ml,沸水浴中保持5min。黄柏中总糖含量为11.18%,RSD为1.14%(n=5)。实验结果表明,精密度、灵敏度都能符合食品分析的要求,分析结果可靠。黄柏中总糖含量较高,值得综合利用和开发。

【】
    王跃华,徐文俊,何俊蓉,等.川黄柏离体培养及药用成分的抑菌试验研究[J].中药杂志,2004,29(10):1002-1003.

  王衡奇,秦民坚,余国奠.黄柏的化学成分及药研究进展[J].中国野生植物资源,2005,20(4):6-8.

  孙伟伟,曹维强,王静.DNS法测定玉米秸秆中总糖[J].食品研究与开发,2006,27(6):120-122.

  Wang FX. Analysis and Measurement of Nutrition Composition in Pleurotus eryng [J]. Food Science,2002,23(4):132-135.

  Ma Y, Wang J, Niu TJ. Determination of the active components of functional food [M]. Beijing:Chemical Industry Press,2005.