艾可合剂抗实验性急性前列腺炎及急性毒性实验

               作者：张敏建, 褚克丹, 程心玲, 潘旭东, 程宛钧, 彭明健, 于开源, 谭育红   
【关键词】  艾可合剂;,前列腺炎;,动物,实验;,急性毒性实验
　　摘要:目的 观察艾可合剂(AKHJ)抗实验性急性前列腺炎的作用及急性毒性反应,考察其有效性和安全性。方法 用1%角叉菜胶生理盐水溶液致大鼠急性前列腺炎模型,观察AKHJ抗实验性急性前列腺炎作用。设AKHJ高、中、低3个剂量组,每日分别给予AKHJ(含生药26.0,13.0,6.5 g/kg)。连续灌胃7 d。模型对照组和假手术组按同法每日灌胃等量蒸馏水。另设最大给药量组和生理盐水对照组,采用灌胃给药。        结果        服用AKHJ后,模型大鼠前列腺质量不同程度减轻;光学显微镜显示腺腔内炎症细胞浸润程度及纤维母细胞增生程度有所减轻,高、中剂量组较模型对照组差别有统计学意义(P<0.01)。按生药量小鼠对AKHJ最大耐受量>156.4 g/kg(生药/体质量),相当于临床给药剂量的20倍。实验期间小鼠活动略减少,未出现中毒症状,AKHJ最大给药量组和生理盐水组小鼠均无死亡,体质量增加相近。  结论 AKHJ具有良好的抗急性前列腺炎作用,且毒性小,安全性高。
　　关键词: 艾可合剂; 前列腺炎; 动物,实验; 急性毒性实验
　　ABSTRACT: Objective To study the effect of “AKHJ” on experimental acute prostatitis and the acute toxicity reaction of AKHJ in rats or mice. Methods        Firstly, the acute prostatitis models induced by 1% carrageen injection in rats and treated with “AKHJ” 6.5, 13, 26 g・kg-1・d-1(crude drug), ig for 7 d, respectively. Secondly, after feeding drugs, observed and recorded poisoning symptoms, and calculated the maximal tolerance. Results  The weight of prostate and the proliferation degree of acute prostatitis were obviously decreased in both high and middle groups of “AKHJ” compared with model group. Maximal tolerance of experimental mice to “AKHJ” was larger than 156.4 g crude drug per kilogram body weight, that was about 20 times as the recommended dose in clinic.  Activity state of the mice was wel1, and the mice were kept alive.  Conclusion “AKHJ” could obviously inhibit experimental acute prostatitis in rats. “AKHJ”  is 1ower toxicity and well tolerantly.
　　KEY WORDS: drug combination; prostatitis; animal,laboratory; acute toxicity tests
　　艾可合剂(AKHJ)主要由北柴胡、杭白芍、枳壳、香附、乌药、川芎、甘草等组成,具有疏肝理气、柔肝止痛等功效,临床用于慢性前列腺炎,取得良好疗效[1]。为进一步探讨AKHJ对前列腺炎疗效机制,笔者采用大鼠模型观察AKHJ抗实验性急性前列腺炎（acute prostatitis,AP)的作用;为评价AKHJ的安全性,对AKHJ进行急性毒性实验(最大给药量实验),报告如下。
　　1 材料和方法
　　1.1 动物        
　　大鼠,SD品系,清洁级,♂,50只,体质量(280±20)g(上海斯莱克实验动物有限责任公司,动物合格证号:0009662)。小鼠,ICR品系,清洁级,♂、♀各20只,体质量(20±2)g(福建医科大学实验动物中心,动物合格证号:0000118,0000124,0000125,0000126)。
　　1.2 药物及剂量设置
　　1.2.1 AKHJ(煎剂,福建省人民制剂室提供,批号:20050711)        
　　每瓶500 mL,瓶装消毒封口,棕咖啡色混悬液,含生药4.7 g/mL,临用时充分摇匀,按比例用蒸馏水稀释至所需要的浓度。该药临床用量为60 mL/d,即相当于1 mL/kg(含生药1 g/kg),按常规方法计算等效剂量,人/大鼠=1/6.45。(1)选用临床用量1,2和4倍的3个等效剂量,即分别为含生药6.5,13.0和26.0 g/kg,灌胃(ig),每日1次,作为低、中、高剂量组。(2)AKHJ急性毒性实验:经过反复预试,按[2]最高浓度、最大容积,最大给药量生药3.76 g/mL,最大容积40 mL/kg体质量。
　　1.2.2 角叉菜胶(粉剂)        
　　辽宁省药物研究所提供(药物批号:2004)。
　　1.3 分组        
　　(1)AKHJ抗AP作用:大鼠按体质量分层随机分5组,即假手术组、模型对照组、AKHJ低、中、高剂量组(分别含生药6.5,13.0和26.0 g/kg),每组10只。后三者灌胃给药,前两者灌胃等量蒸馏水，每日1次×7。(2)AKHJ急性毒性试验:小鼠按体质量分层随机分2组:最大给药量组和对照组,每组20只。前者给予AKHJ 3.76 g/mL(40 mL/kg体质量),后者给予同体积生理盐水,灌胃,每日3次×1,观察时间7 d。
　　1.4 观察指标
　　1.4.1 AKHJ抗AP       
　　解剖观察前列腺形状、色泽及周围粘连情况,前列腺称质量,计算前列腺指数(前列腺湿质量/体质量,g/kg);前列腺液检查:用光学显微镜观察前列腺液的白细胞总数和卵磷脂小体密度[3]。卵磷脂小体密度评分标准[4]:满视野4分;3／4视野3分;1／2视野2分;1／4视野1分。
　　1.4.2 AKHJ急性毒性试验        
　　观察并记录生存状态(行为、皮毛、呼吸、大小便、摄食、饮水、体质量、中枢神经变化等及鼻、眼、口腔分泌物等情况),记录7 d内死亡数及时间。死亡后即刻尸解,观察主要脏器(心、肝、脾、肺、肾等)的变化,并进行病理检查。7 d后处死存活小鼠,解剖内脏器官[3]。
　　1.5方法
　　1.5.1 抗实验性AP        
　　根据文献[3]分组后灌胃给药。于第6 d给药1 h后,在乙醚麻醉下,取下腹正中切口达腹腔,暴露膀胱背侧前列腺,在前列腺背叶注人1%角叉菜胶生理盐水(前一日配制,冰箱储存)0.1 mL,将前列腺复原,逐层缝合关闭切口。假手术组注入生理盐水0.1 mL。连续给药7 d。末次给药后次日处死动物,取出前列腺称湿质量,取前列腺液行白细胞总数和卵磷脂小体密度检测。根据卵磷脂小体密度分级标准统计学处理。
　　1.5.2 急性毒性试验        
　　根据[3]分组,实验前禁食给水4 h,最大给药量组按最高浓度(3.76 g/mL)、最大容积(40 mL/kg)灌胃,每4 h给药1次,连续3次。对照组给等量生理盐水。每天称饲料量,每天上、下午各观察动物1次,每2 d称体质量,连续7 d。统计毒性反应和7 d的死亡情况。
　　2 结果
　　2.1 AKHJ抗实验性AP        
　　模型对照组与假手术组比较,前列腺质量指数明显增大、WBC数增加、卵磷脂小体密度减少,呈现AP的病理变化,表明造模成功。AKHJ组与模型对照组比较,前列腺质量量指数减小、WBC数减少、卵磷脂小体密度增加,表明该药对角叉菜胶前列腺内注射所致AP有一定的抗炎作用(表1)。表1 艾可合剂对大鼠急性前列腺炎的影响（略）
　　2.2 AKHJ急性毒性试验        
　　最大给药量组给予AKHJ 30 min后,动物活动减少、喜卧、毛松、腹胀、3~4 h后排黑色软便,小便增多(垫料潮湿),第2 d恢复正常,7 d内无死亡,未出现中枢神经系统症状。最大给药量组和对照组体质量相近。小鼠AKHJ灌胃1 d最大给药量为生药156.4 g/kg,灌胃量达临床20倍剂量时急性毒性小,短时间内恢复正常,表明AKHJ对小鼠基本无急性毒性作用。
　　3 讨论
　　3.1 AKHJ方药分析        
　　AKHJ的组方中,柴胡具有显著的抗炎作用,柴胡抗炎的有效成分为柴胡皂苷。柴胡皂苷对许多炎症过程包括渗出、毛细血管通透性、炎症介质释放、白细胞游走和结缔组织增生等都有影响[5];同时具有解痉止痛作用,可解除骨骼肌、胃肠平滑肌及子宫平滑肌痉挛性收缩引起的疼痛反应[6]。枳壳可以调整平滑肌,实验证实其100％水煎剂能增强绵羊小肠的位相收缩,加强小肠的排空作用。枳壳水煎剂的各种浓度(12.5％,25％,50％,75％,100％)对离体兔肠均有抑制效应,并呈现量效关系[7]。枳壳水煎剂能加快正常小鼠的小肠推进功能[8]。乌药亦具有镇痛、抗炎作用[9]。川芎有效成分川芎哚,给小鼠灌胃 300 mg/kg,有明显镇痛作用[10]。
　　3.2 AKHJ实验发现       
 
　　进行有关AP研究时,因为正常的前列腺液含大量卵磷脂,前列腺炎时巨噬细胞吞噬大量脂类,使前列腺液内卵磷脂小体减少或消失,而炎症扩张血管、增加血管通透性,白细胞外渗,使前列腺液中白细胞数增多。所以常用镜检前列腺液中卵磷脂小体密度与单位体积的白细胞数、前列腺指数作为AP的实验指标[11]。实验证实AKHJ显著升高角叉菜胶所致实验性AP大鼠前列腺液中卵磷脂小体密度,减少白细胞数目,改善前列腺指数,表明它具有良好的抗实验性AP作用。
　　3.3 AKHJ安全性研究        
　　目前中医药对于前列腺炎的治疗主要以清利湿热为主,但长期使用一则败胃伤脾,二则伤阳引起阳痿、早泄、不育等;伴不育,阳痿时常用温肾壮阳的药物,易导致相火内盛,加重病情[12]。如祛湿太过温燥则易伤阴,清热过用苦寒则必碍脾胃,化瘀太峻猛则易伐正[13]。AKHJ以疏肝理气为主,药性平和,无伤阳或助邪之弊端,且动物急性毒性试验表明小鼠灌胃临床用药剂量20倍的AKHJ,未出现明显急性毒性反应及死亡,证实该药基本无急性毒性作用。
                
　　实验表明AKHJ具有良好的抗AP作用,且毒性小,安全性高,值得进一步研究。
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