乳腺癌中的ER,PR,P53,C?erbB?2和PCNA的表达及临床意义

             作者：韩静绮, 王丰梅，冶俊玲

【摘要】  目的：探讨乳腺癌组织中雌激素受体(ER)，孕激素受体(PR)，p53，C?erbB?2和增殖细胞核抗原(PCNA)在乳腺癌中的表达和与临床病理的关系. 方法：应用免疫组化方法检测经病理证实的92例乳腺癌组织ER，PR，p53，C?erbB?2和PCNA的表达. 结果：92例患者ER，PR，P53，C?erbB?2和PCNA表达的阳性率分别为60.9%, 58.8%, 29.3%, 71.7%和59.8%. ER的表达在不同肿瘤大小、腋窝淋巴结有无转移组别中差异有统计学意义(P<0.05)；PR的表达与年龄、肿瘤大小、分期及淋巴结转移情况均无统计学意义(P>0.05)；而C?erbB?2和PCNA在淋巴结有无转移之间表达差异具有统计学意义(P<0.05). 结论：联合检测乳腺癌组织中ER，PR，P53，C?erbB?2和PCNA的表达对于判断乳腺癌预后和指导具有临床价值.

【关键词】  乳腺肿瘤；雌激素受体；孕激素受体；p53；C?erbB?2基因；增殖细胞核抗原；免疫组织化学

　　【Abstract】 AIM: To study the expressions of estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR), P53, C?erbB?2 and proli?ferating cell nuclear antigen (PCNA) in breast cancer tissues and their clinical significance. METHODS: The expressions of ER, PR, P53, C?erbB?2 and PCNA were detected by immunohistochemistry in 92 cases of breast cancer proved pathologically. RESULTS: The positive rates of ER, PR, P53, C?erbB?2 and PCNA protein were 60.9%, 58.8%, 29.3%, 71.7% and 59.8%  respectively in breast cancer tissues. The expression of ER was significantly different both in different tumor size groups and in groups with or without lymph node metastasis (P<0.05). Expression of PR had no statistically significant difference among various age, tumor size, tumor stage groups and groups with or without lymph node metastasis. The expressions of C?erbB?2 and PCNA were positively correlated with lymph node metastases (P<0.05). CONCLUSION: Combined detection of expressions of ER, PR, P53, C?erbB?2 and PCNA in primary breast carcinoma has practical value in the evaluation of prognosis and therapeutic effects of breast cancer patients.

　　【Keywords】 breast neoplasms；ER；PR；P53；C?erbB?2; PCNA; immunohistochemistry

　　0  引言
   
　　乳腺癌是危害妇女健康的常见恶性肿瘤,且近年在我国许多大、中城市,乳腺癌的发病率有上升趋势，居女性恶性肿瘤的首位,已居城市妇女恶性肿瘤死因的首位. 有研究［1］表明，肿瘤的发生为多基因参与和多阶段协同作用的结果.影响乳腺癌预后的因素较多，其中激素受体水平和淋巴结转移是两个重要因素.本研究采用免疫组化方法检测乳腺癌组织中雌激素受体（estrogen receptor，ER），孕激素受体（progesterone receptor，PR），p53，C?erbB?2 和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的表达,结合临床病理因素﹙患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移状况、临床分期﹚,探讨其相互之间的相关性及其临床意义.

　　1  材料和方法

　　1．1  材料  选择青海大学附属病理科2003?07/2006?07经病理证实女性原发性乳腺癌根治手术标本92例, 年龄30～76（中位年龄57）岁. 患者术前均未做放疗和化疗. 根据2003年WHO乳腺癌临床TNM分期标准：Ⅰ期15例,Ⅱ期56例,Ⅲ期21例,其中有淋巴结转移48例,未见淋巴结转移44例. 免疫组化第一抗体ER, PR, P53, C?erbB?2 和PCNA及相关试剂均为福州迈新生物技术开发公司产品.

　　1．2  方法  采用链霉菌抗生物蛋白?过氧化物酶链接法(SP法),行免疫组织化学检测. 步骤如下：所有标本经40 g/L甲醛固定,常规脱水、透明、浸蜡,石蜡包埋, 切片厚4 μm; 二甲苯脱蜡，梯度乙醇至水化后高压锅热处理5～8 min, 过氧化物酶阻断血清封闭，加一抗孵育, 4℃过夜，接着加二抗及过氧化物酶标记的链霉菌抗生物素蛋白. 其余步骤按SP试剂盒操作步骤进行，DAB显色, 苏木素复染. 免疫组化染色用PBS代替一抗作阴性对照，以试剂商提供的阳性片作为阳性对照. 结果判断：ER, PR, P53及PCNA的阳性表达以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，C?erbB?2的阳性表达为细胞膜上出现棕黄色颗粒为阳性细胞. 采用国内通用标准，根据阳性细胞所占的百分数分级. 评定标准: 10%～25%为“+”; 26%～75%为“?”;76%以上为“?”.
   
　　统计学处理：组间率的比较采用χ2检验， P<0.05为差异具有统计学意义.

　　2  结果

　　2．1  乳腺癌组织中ER, PR, P53, C?erbB?2和PCNA表达  92例乳腺癌患者中，ER阳性表达56例(60.9%), PR阳性表达54例(58.8%,),ER和PR在不同年龄与不同临床分期乳腺癌组织中的阳性表达率差异无统计学意义(P>0．05);在不同肿瘤大小乳腺癌组织中ER的阳性表达率差异有统计学意义(P＜0．05),且腋窝淋巴结无转移乳腺癌组织中ER的阳性表达率明显高于有淋巴结转移者(P<0.01). 本组研究中,P53阳性表达27例(29.3%), 与临床分期、淋巴结转移情况均无显著相关(P>0．05). C?erbB?2阳性表达66例(71.7%),结果显示有腋窝淋巴结转移的阳性表达38例(86.4%),明显高于无腋窝淋巴结转移的阳性表达28例(58.3%),其差异具有显著的统计学意义(P<0.01，图1).

　　2．2  乳腺癌的ER, PR, P53, C?erbB?2和PCNA与临床关系  PCNA阳性表达55例(59.8%),在不同肿瘤大小与有无腋窝淋巴结转移中的表达差异均具有统计学意义(P<0．05),且PCNA的表达随临床分期的增高而增高(表1).

　　A:乳腺癌细胞中ER的阳性表达; B:乳腺癌细胞中P53的阳性表达; C:乳腺癌细胞中PR的阴性表达; D:乳腺癌细胞中PCNA的阳性表达.

　　图1  免疫组化检测结果  SP ×100（略）

　　表1  92例乳腺癌的ER，PR，P53，C?erbB?2和PCNA表达与临床关系（略）

　　aP＜0.05, bP＜0.01.

　　3  讨论
   
　　乳腺是女性激素作用的靶器官之一,正常乳腺上皮细胞存在ER和PR,但含量极低.当细胞发生癌变时,ER和PR可部分或全部失去，据此,将乳腺癌分为激素依赖性乳腺癌和非激素依赖性乳腺癌［1］，乳腺癌癌细胞分化程度高,则恶性程度低；其ER, PR的阳性表达率高,则内分泌效果和预后较好［2］.我们的研究结果显示，ER, PR阳性率分别为60.9%和58.8%,而且无淋巴结转移乳腺癌组织中ER的阳性率明显高于有淋巴结转移者(P<0.05),与报道结果一致.
   
　　P53抑癌基因突变或失活后，失去对细胞周期负调控作用,导致恶性肿瘤发生， 并且P53阳性表达与乳腺癌的临床分期晚和腋窝淋巴结转移等预后不良因素有关［3］. 提示P53蛋白的表达是一个估计乳腺癌生物学行为和独立的因素之一. 本组资料结果显示乳腺癌组织中P53的阳性率为29.3%,其表达与淋巴结转移状况无统计学意义,与一些文献报道结果存有不同.
   
　　癌基因C?erbB?2在结构上与表皮生长因子同源,作为凋亡抑制基因可阻断细胞的程序性死亡而不影响细胞的增殖［4］. 我们检测92例乳腺癌 C?erbB?2阳性率为71.7%, PCNA表达阳性率达59.8%,且随着临床分期的增高, C?erbB?2和PCNA表达强度也相应增加,与淋巴结转移与否具有相关性(P<0.01),支持PCNA是细胞增生活跃的指标.本组PCNA阳性表达率伴腋窝淋巴结转移的乳腺癌原发灶高于无转移者(P<0．01),表明PCNA过表达增加了瘤细胞转移的危险性［5］.
   
　　综上所述，我们的研究表明,ER, PR, P53, C?erbB?2和PCNA在乳腺癌组织中有相当高的表达率, 分子标志物的表达均与乳腺癌的生物学行为和预后有关, 通过多项生物学指标的联合检测乳腺癌并作出更为准确的预后判断, 对指导治疗和提高疗效有重要意义.

【文献】
  　　［1］ Fiets WE,Bellot FE,Struikmans H,et al. Prognosis value of mitotic counts axillary node negative breast cancer patients with predominantly well?differentiated tumours［ J］. Eur J Surg Oncol, 2005, 31(2): 128-133.

　　［2］ 王跃华，赵 铁，周 娜. 雌激素受体、孕激素受体、P53基因和C?erbB?2在乳腺癌组织中的表达及意义［J］.临床保健杂志，2006，9(4):360-361.

　　［3］ 郑雅娟. 乳腺癌预后的分子标志物研究进展［J］.国外医学肿瘤学分册，2005，32(4)：286-288.

　　［4］ 闵大六，王保太，孟 刚，等.乳腺癌和癌前病变中细胞凋亡及其与bcl?2、PCNA蛋白表达的关系［J］.临床与实验病杂志，1999，2(15)：36-39.

　　［5］ 张 琼，朱玉兆.C?erbB?2、P53、PCNA、ER、PR及TopoⅡ在乳腺癌的表达及其临床意义［J］.蚌埠医学院学报，2006, 31(5): 447-450.