血小板活化与冠心病的相关性
CD62P、CD42b能反映血小板活化程度，是血小板活化最敏感的指标［１］。而流式细胞术为评价血小板在体内的活化程度提供了准确的特异性指标［2］。
1材料与方法
1. 1一般资料
CHD患者93例，所有患者均曾作冠状动脉造影确诊，同时符合WHO的冠心病诊断标准。其中男60例，女33例；年龄41～78岁，平均59.3岁；心绞痛（AP）患者69例、急性心肌梗死（AMI）患者24例。健康对照组107例，其中男71例，女36例；年龄38～73岁，平均57.5岁；均为健康体检者，无心脏病史，无冠心病危险因素，心电图正常。以上各组间在年龄，性别及其他一般情况均无显著差异。试剂及流式细胞仪ＦＡＣＳｖａｎｔａｇｅ均为美国BD公司产品。
1. 2检测方法(1)样品处理：
取静脉血1.8ml，置于含0.2 ml 3.8％枸橡酸钠抗凝剂试管中混匀。离心（800r/min,5min）分离得到富血小板血浆。加入等量2％多聚甲醛（终浓度为1%）固定15 min，用PBS-EDTA缓冲液悬浮血小板并洗涤2次（1000r/min ,15min），然后血小板悬浮于PBS-EDTA缓冲液中，并调节血小板浓度至1×1010/L；(2)荧光染色：取两支试管，各加入患者血小板悬液100μl，再加入异硫氰酸荧光素（FITC）标记的鼠抗人CD42b单克隆抗体20μl及藻红蛋白（PE）标记的鼠抗人CD62P单克隆抗体20μl混匀。室温下避光30min，PBS洗涤2次（1000r/ min,15 min）,用0.5ml PBS悬浮并转移至流式上样管，上机检测；(3)流式细胞仪检测和数据分析：前向角和侧向角均采用对数放大，设门选取血小板，每份样品收集20000个血小板，Cellquest软件分析CD62P、CD42b的阳性表达率(%)。
1. 3统计学处理
计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验。
2结果
2. 1与对照组相比，CHD患者CD62P活性显著增高（Ｐ<0.01），而CD42b活性显著降低（Ｐ<0.01）。
2. 2CHD患者中急性心肌梗死CD62P活性比心绞痛（AP）显著增高（Ｐ<0.01），而CD42b活性显著降低（P<0.01）。见表1。表1冠心病各组与健康人血小板CD62P、CD42b的表达（略）注：与对照组相比，*P<0.01;与A组相比，△P<0.01
3讨论
血小板活化与多种血栓性疾病相关，检测体内有无血小板活化及其程度对血栓性疾病的诊断具有重要意义［3］。冠心病的微血管病变与患者体内的血栓前状态，血管内皮细胞损伤，血小板粘附、凝集和释放等活化功能增强及抗凝功能减退等因素有密切关系［4］。在冠心病的发生中，血小板活化和凝血系统共同作用是血栓形成的基础，最主要的当属血小板活化。当血管内皮损伤时，胶原的暴露使血小板粘附、激活，使原本存在于静息血小板胞浆内a颗粒膜上的糖蛋白CD62P随着活化的血小板脱颗粒，发生易位而与血小板膜融合，并能被特异性单克隆抗体识别。CD42b是血小板的主要糖蛋白之一，均匀分布在整个血小板膜表面，当血小板被激活时，CD42b迅速从膜表面转移到中央管中，导致膜表面含量减少。因此可以看出CD62P、CD42b都是血小板活化的分子标志物，但反映血小板活化的途径不同，两者共同检测可精确的判断血小板的功能状态，在血栓性疾病的临床研究中具有较大价值。
本组资料显示，正常人血循环中，活化血小板标志CD62P有低水平表达而CD42b有高水平表达。表明正常人也有少量血小板被激活，这是机体为维持正常的凝血－抗凝系统功能平衡的一种表现。而CHD患者外周血中CD62P的阳性表达显著高于正常对照组（p<0.01）；CD42b的阳性表达显著低于正常对照组（p<0.01）。表明CHD患者体内确实存在血小板活化现象，提示CHD患者的血小板的粘附、聚集、释放反应均增高。同时发现急性心肌梗死组较心绞痛组 CD62P的阳性表达显著增高（p<0.01）而CD42b的阳性表达显著降低（p<0.01）。表明随着病情的进一步发展，血小板活化程度亦随之加深，致使微血栓的形成，微血栓进一步促使血小板活化，最终导致动脉的阻塞，发展为心肌梗死，这与Furman等的报道相符合［5］。提示血小板活化程度与CHD的发生、发展密切相关。
综上所述，对血小板活化水平的测定可作为CHD早期诊断的一个客观依据,同时对CHD患者的血小板活化程度进行动态观察，可及时掌握患者的病情进展及预后判断，从而有利于临床的。
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2 Auat AK.The clinical utility of flow cytometry in the study of platelets.Semin-Hematol,2001,38(2):160～168.
3 胡玉卿，赵洁，詹建刚，等.用流式细胞术检测CD62P、CD63对预测血栓性疾病的临床意义.医学杂志，2003，13（2）：92～93.
4 王振义，李家增，阮长耿，等.血栓与止血. 基础理论与临床.第 2版.上海：上海出版社，1996.525～526.
5 Furman MI,Benoit SE,Band Mr,et al.Increased platelet reaetivity and circulating monocyte-platelet aggregates in patients with stable coronary artery disease .J An Coll Cardiol,1998,31(2):352.
