Survivin和C-myc在肝门部胆管癌组织中的表达及其相关性研究
作者：韩兴华 智绪亭 刘清波 孙汉臻 石晓岩
【摘要】 目的：探讨Survivin和C-myc在肝门部胆管癌中的表达、临床意义及相互关系。方法: 用免疫组织化学SP法检测45例肝门部胆管癌及20例非癌胆管组织中Survivin和C-myc的表达。结果: 45例肝门部胆管癌组织中Survivin和C-myc的表达率分别为68.9%（31/45）和62.2%（28/45），非癌胆管组织中Survivin和C-myc的表达率分别为0和15%（3/20），差异有统计学意义（P<0.05）。肝门部胆管癌组织中Survivin的表达与淋巴结转移有关（P<0.05），C-myc的表达与肿瘤分化程度和淋巴结转移有关（P<0.05）,它们的表达与患者的性别、年龄，肿瘤大小及Bismuth分型无关（P>0.05）。Survivin、C-myc的表达呈正相关关系（P<0.05）。 结论: Survivin、C-myc在肝门部胆管癌中的表达呈正相关关系，共同在肝门部胆管癌的发生、、转移中起一定作用，Survivin有望成为肝门部胆管癌的新靶点。
【关键词】 胆管肿瘤 Survivin 基因，myc
Expression and correlation of Survivin and C-myc in
【ABSTRACT】 Objective: To investigate the expression of Survivin and C-myc with the clinical significance of hilar cholangiocarcinoma and the correlation between the expressions of Survivin and C-myc. Methods: The expressions of Survivin and C-myc in 45 cases of hilar cholangiocarcinoma and in 20 cases of non-carcinoma bile duct tissues were examined by immunohistochemistry. Results: In 45 cases of hilar cholangiocarcinoma, the positive rates of Survivin and C-myc were 68.9%（31/45）and 62.2%（28/45）, the positive rates of Survivin and C-myc in 20 cases of non-carcinoma bile duct tissues were 0 and 15%（3/20）respectively, the difference was significant (P<0.05). The expression of Survivin in hilar cholangiocarcinoma was related with lymph node metastasis (P<0.05), the expression of C-myc was related with differentiated degree and lymph node metastasis(P<0.05). The expressions of Survivin and C-myc had no association with gender（P>0.05）, age（P>0.05） and tumor size（P>0.05）. The correlation between the expressions of Survivin and C-myc was significant (P<0.05). Conclusions: The expression of Survivin was significantly related with expression of C-myc in hilar cholangiocarcinoma.
【KEY WORDS】Bile duct neoplasms·Survivin·Genes，myc·Immunohistochemistry
本研究应用免疫组化SP法检测肝门部胆管癌中Survivin与C-myc的表达，探讨二者在肝门部胆管癌的形成、发展和转移中的作用及其相互关系。
1 材料和方法
1.1 标本来源 山东大学齐鲁1999～2005年行根治性切除、病理证实为肝门部胆管癌45例，男31例，女14例，年龄33～74岁，平均55.8岁。组织分化：高分化腺癌11例，中分化腺癌16例，低分化腺癌18例；Bismuth分型：I型10例，Ⅱ型14例，ⅢA型6例，ⅢB型15例。所有患者术前均未行放、化疗。另取经病理证实的非癌胆管组织20例作为对照。
1.2 主要试剂 兔抗人Survivin免疫组化多克隆抗体和鼠抗人C-myc免疫组化单克隆抗体均购于福州市迈新生物技术开发公司, 免疫组化SP试剂盒购于北京中杉金桥生物技术公司。
1.3 Survivin和C-myc免疫组化检测的表达 所有标本连续切片2张，厚度为4 μm， 58℃烤箱中烘干溶蜡1 h，然后进行免疫组织化学（SP法）染色，以福州市迈新生物技术开发公司的阳性对照片作为阳性对照。
1.4 阳性结果判定 Survivin主要表达于细胞浆，C-myc可在细胞浆及胞核表达，二者染色均为淡黄～深棕黄色，以阳性细胞数≥5%且染色强度高于背景者为阳性，阳性细胞数<5%且染色强度与背景无明显差异者为阴性。
1.5 统计学分析 应用SPSS10.0 软件进行统计分析， 采用χ2检验或精确概率法，相关分析采用列联表资料的χ2检验，取α=0.05为显著性检验水准。
2 结果
2.1 Survivin、C-myc在细胞中的表达定位 二者染色均为淡黄～深棕黄色颗粒，Survivin主要表达于肿瘤细胞浆，在正常组织中不表达，C-myc可在细胞浆或胞核中表达（图1）。
2.2 Survivin和C-myc在肝门部胆管癌和非癌胆管组织中的表达 对照组组织中Survivin和C-myc阳性表达率分别为0%（0/20）和15%（3/20），肝门部胆管癌组织中Survivin和C-myc阳性表达率分别为68.9%（31/45）和22.2%（28/45），与对照组比较，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。
2.3 Survivin和C-myc的表达与肝门部胆管癌临床病理特征之间的关系 Survivin的阳性表达与有无淋巴结转移有相关性；C-myc的阳性表达与肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移有关（表1）。
2.4 Survivin和C-myc表达的相关性 表2结果显示Survivin与C-myc表达有正相关关系。
3 讨论
细胞增殖和凋亡的协调与平衡是人体正常发育和维持内环境稳定所必需的，二者失衡将导致细胞不适当增殖和畸形细胞存活，它在肿瘤的发生、进展中发挥着重要作用［１］。SVV是一种结构独特的哺乳类凋亡抑制蛋白（IAP）家族成员，通过抑制细胞凋亡信号传导通路中半胱氨酸转移酶Caspase-3、Caspase-7的活性而抑制细胞凋亡［２］,并能抑制由Fas、Bax和抗肿瘤药物等诱导的凋亡［３］；而且SVV选择性的表达于细胞周期的G2/M期，可竞争性与CDK4/P16结合，促进S期进程，参与有丝分裂的调节和胞质分裂，这种细胞增殖和凋亡的双向调节功能，是家族中其他成员没有的。
研究结果显示，Sｕｒｖｉｖｉｎ在肝门部胆管癌组织中的阳性表达率为68.9%，非癌胆管组织中未表达，Sｕｒｖｉｖｉｎ的表达与肝门部胆管癌的分型、性别、年龄、分化程度、大小等临床病理特征无关，与淋巴结转移有关，说明Sｕｒｖｉｖｉｎ与肝门部胆管癌的发生有关，是其发生的早期事件，并能提示肿瘤的恶性程度，在肿瘤的转移和复发中起着一定作用。Sｕｒｖｉｖｉｎ仅在癌组织中表达，不在成人分化组织中表达［4］， 这种肿瘤组织的选择性表达及抑制抗癌药物引起凋亡的机制，目前已成为新的恶性肿瘤靶点［３］。活体内、体外研究表明，Sｕｒｖｉｖｉｎ反义寡核苷酸及显性负突变体可导致细胞周期的异常和细胞凋亡，降低肿瘤生长潜能，增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性［５，６］。本研究结果也证实了Sｕｒｖｉｖｉｎ在肝门部胆管癌中的作用及癌组织中表达的选择性，提示它作为肝门部胆管癌基因治疗靶点的可能。
C-myc是癌基因myc家族的重要成员，它选择性作用于细胞分裂周期的G1/S期，其表达是细胞能进入S期的关键。G1期是细胞整合各种信号的复杂时期，在此期，C-myc在不同内、外环境下起到细胞增殖与凋亡的双向调控，参与肿瘤的形成和恶性转化的作用［７，８］。本实验结果中，C-myc在癌组织中高表达（62.2%），显著高于对照组表达率（15%），且表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关，与性别、年龄及大小等特征无关，揭示C-myc也参与了肝门部胆管癌的形成、和转移，并能够提示肿瘤的恶性程度。
Sｕｒｖｉｖｉｎ、C-myc作为细胞周期G2/M、G1/S期的调控因子［１２，１３］，应该存在着某种联系，共同调节细胞的增殖与凋亡。研究表明，Sｕｒｖｉｖｉｎ通过提高C-myc依赖性人类端粒末端转移酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase, hTERT）的基因转录而增加端粒末端转移酶的活性，并且增强C-myc结构中丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化，上调C-myc的表达，从而促进细胞增殖、延长细胞的生存期。在Survivin基因转染子中，当Sｕｒｖｉｖｉｎ的表达被Sｕｒｖｉｖｉｎ-siRAN（小干扰RNA）抑制时，C-myc的DNA结合活性下调［９－１１］。实验结果显示，在Sｕｒｖｉｖｉｎ阳性表达的31例肝门部胆管癌中，有24例C-myc阳性，14例阴性中仅有4例C-myc阳性，显示二者的表达呈正相关关系，揭示了Sｕｒｖｉｖｉｎ高表达促进了C-myc的表达，共同参与了肝门部胆管癌的发生、发展及转移。
【】
[1] Yang E, Korsmeyer SJ. Molecular thanatopsis: A discourse on the BCL2 family and cell death[J]. Blood, 1996,88(2): 386–401.
[2] Asanuma K, Kobayashi D, Furuya D, et al. A role for survivin in radioresistance of pancreatic cancer cells[J]. Cancer Research, 2002, 93(9): 1057– 1062.
[3] Tamm I, Wang Y, Sausville E, et al. IAP-family protein survivin inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas(CD95), bax, caspases, and anticancer drugs[J]. Cancer Res, 1998, 58 (23):5315–5320.
[4] Adida C, Crotty PL, McGrath J, et al. Developmentally regulated expression of the novel cancer anti-apoptosis gene survivin in human and mouse differentiation[J]. Pathology, 1998,152(1):43–49.
[5] Ambrosini G, Adida C, Sirugo G, et al. Induction of apoptosis and inhibition of cell proliferation by survivin gene targeting[J]. Ｊ Bio Chem, 1998, 273(18):11177-11182.
[6] Zaffaroni N, Daidone MG. Survivin expression and resistance to anticancer treatments perspectives for new therapeutic interventions[J]. Drug Resist Updat, 2002,5(2): 65-72.
[7] 林晨，张雪艳，程金科，等.腺病毒介导的反义C-myc选择性诱导肿瘤细胞G1期阻滞和凋亡的研究[J].中华医学杂志，1999，79(8):617-621.
[8] 曹嵘，李进.C-myc的结构和功能[J].国外医学遗传学分册，1997，20(3)：116-119.
[9] Endoh T, Tsuji N, Asanuma K, et al. Survivin enhances telomerase activity via up-regulation of specificity protein 1-and c-myc-mediated human telomerase reverse transcriptase gene transcription[J]. Exp Cell Res, 2005,305(2): 300-311.
[10] 朱红霞，刘爽.抗凋亡基因Survivin促进细胞转化的作用机制[J].中华医学杂志，2002，82(5)：338-340.
[11] 王少军，张峰，邹奇飞，等.凋亡抑制因子Survivin在肝癌中的表达和意义及其与c-myc的相关性[J].实用临床医药杂志，2005，9(9):75-78.
[12] Uren AG, Wong L, Pakusch M, et al. Survivin and the inner centromere protein INCENP show similar cell-cycle localization and gene knockout phenotype[J]. Curr Biol, 2000,10(21):1319-1328.
[13] Bartek J, Bartkova J, Vojtestk B, et al. Patterns of expression of the P53 tumor suppressor in human breast tissuses and tumours in situ and in vitro[J]. Int J Cancer, 1990,46(5):839-844.
