COX-2与p53在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
作者：王志刚 周彩存 欧阳永娥 陈伟文 叶晓艺
【摘要】 ［目的］ 探讨COX-2和p53蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达和临床意义。［方法］ 采用免疫组织化学法检测60例NSCLC组织中COX-2与p53蛋白的表达情况。［结果］ COX-2与p53蛋白在NSCLC中阳性表达率分别为56.67%和61.67%。COX-2的表达水平与肺癌的病理类型相关（P=0.009）。COX-2阳性表达的Ⅲ期NSCLC患者中位生存期（MST）和3年生存率均显著低于COX-2阴性表达患者；但p53阳性、阴性表达患者MST和3年生存率无显著性差异。Cox逐步回归分析显示，TNM分期和肿瘤组织COX-2表达水平是NSCLC预后独立因素。［结论］ COX-2的高表达与NSCLC患者预后不良相关。
【关键词】 非小细胞肺癌 免疫组织化学 COX-2 p53 预后
Expressions of COX-2 and p53 in Patients with Non-small Cell Lung Cancer and Their Significance
Abstract: ［Purpose］ To investigate the expressions of cyclooxygenase 2(COX-2) and p53 in the patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) and their clinical significance. ［Methods］ The expressions of COX-2 and p53 were detected with immunohistochemical staining in 60 cases of NSCLC. ［Results］ The expressions of COX-2 and p53 in NSCLC were 56.67% and 61.67%, respectively. The expression of COX-2 was correlated with pathological types (P=0.009). Median survival time(MST) and 3-year survival in stage Ⅲ patients with positive COX-2 expression were significantly lower than those with negative COX-2 expression, but median survival time and 3-year survival were not significantly different between the patients with positive or negative p53 expression. The Cox-regression analysis showed that TNM staging and COX-2 expression were independent prognostic factors in patients with NSCLC. ［Conclusions］ High expression of COX-2 is related with poor prognosis in NSCLC.
Key words: non-small cell lung cancer; immunohistochemistry; cyclooxygenase-2; p53; prognosis
肺癌是临床常见的恶性肿瘤，现已成为人类癌症死亡的最主要原因之一。近年研究表明，COX-2与p53蛋白在许多恶性肿瘤组织中上调表达。临床研究显示，COX-2抑制剂赛来昔布联合紫杉醇非小细胞肺癌（NSCLC）可使患者生存期和疗效得到改善[1]；腺病毒携带野生型p53基因（Ad-p53）治疗NSCLC取得了较好的疗效[2]。本研究应用免疫组化方法检测COX-2和p53蛋白在NSCLC中的表达情况，并探讨它们与NSCLC患者临床病理特征及预后之间的关系。
1 材料与方法
1.1 临床资料
选取根治手术后的NSCLC标本60例，其中男性45例，女性15例；年龄32岁～77岁，中位年龄59岁；腺癌与鳞癌各30例。参照UICC 1997年TNM分期，Ⅰ期15例、Ⅱ期13例和Ⅲ期32例。
1.2 方 法
鼠抗人p53单克隆抗体购自福州迈新公司；兔源性抗COX-2多克隆抗体为美国Caycam Chemical公司的产品。手术石蜡切片经常规脱蜡水化后，以3%H2O2孵育20min灭活内源性过氧化物酶，蒸馏水洗3次，每次5min；微波抗原修复5min，0.1mol/L PBS洗涤3次，每次5min；滴加正常血清封闭液，室温30min，除去多余液体；滴加1∶100鼠抗p53单克隆抗体或1∶200兔抗COX-2多克隆抗体37℃ 1h，4℃冰箱放置过夜；0.1mol/L PBS洗涤3次，每次5min；滴加生物素化二抗，37℃ 60min。0.1mol/L PBS洗涤3次，每次5min；滴加试剂SABC，37℃ 60min，0.1mol/L PBS洗涤3次，每次5min；DAB显色5min；苏木素复染，脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。
1.3 结果判断
COX-2胞浆染色出现棕黄色颗粒。参照Niki[3]的方法来判断免疫组化COX-2的表达水平，即不表达或阳性细胞数＜10％为“-”；视野中阳性细胞在10％～30％为“+”；阳性细胞数＞30％为“++”。p53为胞核中出现棕黄色颗粒，胞浆或胞膜不着色，不表达或阳性细胞数＜5％为“-”；阳性细胞数＞5％为“+”。
1.4 统计学处理
COX-2或p53表达阳性与阴性病例的比较用χ2检验，中位生存期的比较采用秩和检验，COX-2与p53表达之间的关系用Spearman等级分析，总体生存分析的比较用Kaplan-Meier生存曲线，影响NSCLC患者术后生存的相关因数分析采用Cox逐步回归分析法。其中手术切除范围定义为≤一叶为“1”，一侧全肺为“3”，介于上述两者之间为“2”。以上数据均采用SPSS10.0统计软件分析处理。
2 结 果
2.1 COX-2、p53表达在NSCLC中的免疫组织化学染色
COX-2在NSCLC的表达为细胞浆和细胞膜中显示的棕黄色染色颗粒（图1）；p53在NSCLC的表达为细胞核中显示的棕黄色染色颗粒（图2）。COX-2和p53在肺癌邻近组织中不表达或仅有微弱表达，而在肺癌组织中表达明显增强。
2.2 COX-2、p53表达与NSCLC临床病理特征关系
在60例NSCLC标本中，COX-2阳性表达率为56.67%（34/60），p53阳性表达率为61.67%（37/60）。其中肺腺癌COX-2阳性表达率为73.33％（22/30），显著高于肺鳞癌的40.00％（12/30）两者相比较差异有显著性（P=0.009），而肺腺癌和肺鳞癌p53阳性表达率差异无显著性（P=0.184）。COX-2与p53的表达水平与患者的年龄、性别、TNM分期、分化程度、淋巴结转移等因素无显著性相关（见表1）。
2.3 COX-2、p53表达与患者生存期之间的关系
本组60例患者中位生存时间（MST）为32个月，其中26例COX-2表达阴性患者的MST>45个月，3年生存率为65.38％，而COX-2表达阳性患者的MST仅为22个月，3年生存率为35.02％，两组比较χ2值分别为4.34与6.44，P值均＜0.05，差异有显著性（见图3）。但在23例p53表达阴性患者的MST为25个月，3年生存率为39.13％，p53表达阳性患者的MST为38个月，3年生存率为54.05％。两者之间比较差异无显著性（χ2值分别为1.396与1.265，P值均>0.05）。
按TNM分层，28例Ⅰ期和Ⅱ期患者中，COX-2表达阳性与阴性患者的MST均>45个月，组间比较差异无统计学意义（χ2＝0.738，P＞0.05）。但在Ⅲ期32例中，COX-2表达阴性者MST为45个月，而COX-2表达阳性者中只有16个月，差异具有统计学意义（χ2＝4.979，P<0.05）。在28例Ⅰ期和Ⅱ期患者中，p53表达为阳性或阴性者MST均>45个月。而在Ⅲ期32例中p53表达为阳性者的MST为34个月，p53表达为阴性者的MST为14个月，两组之间差异无统计学意义（χ2＝3.623，P>0.05）。
2.4 多因素逐步Cox回归分析
将患者的性别、年龄、肿瘤的病理类型、分化程度、TNM分期、手术方式、COX-2及p53表达情况等纳入Cox回归模型，确定初步筛选水平为0.1，用逐步回归法进行统计分析，结果见表2，可见患者的TNM分期和肿瘤细胞COX-2表达水平对生存时间有显著性影响（P值均小于0.05）。
2.5 p53与COX-2表达的关系
在p53阳性表达的37例NSCLC患者中，COX-2阳性表达率为54.05%（20/37）；p53阴性表达的23例NSCLC患者中，COX-2阳性表达率为60.87%（14/23）。Spearman等级相关分析示COX-2表达与p53表达无显著性相关（r=0.110，P=0.403），见表3。
3 讨 论
COX-2为诱导型基因表达蛋白，在多数正常组织中不表达。在病理状态下，许多生长因子、肿瘤促进因子、癌基因等均可诱导其表达，与炎症和肿瘤的发生关系密切[4]。研究发现COX-2的表达水平在NSCLC中明显高于正常肺组织，而腺癌COX-2的表达水平明显高于鳞癌[5]，这与本研究结果相符。本文发现COX-2的表达与NSCLC的组织学类型、分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移及患者的年龄、性别等因素无显著性相关，提示COX-2的表达可能发生在NSCLC的早期阶段，在肺腺癌中具有普遍意义[6]。
COX-2在NSCLC患者中的表达状况和预后之间的关系尚有争议。Achima等[7]认为Ⅰ期肺腺癌患者中COX-2的表达增高与患者的生存期缩短密切相关（P=0.034）。本组资料显示，只有Ⅲ期患者COX-2表达增高者预后不良；而在Ⅰ、Ⅱ期患者中，COX-2表达状况与MST无明显关系。其原因可能是随访时间较短，COX-2表达或不表达的Ⅰ、Ⅱ期患者在随访期尚未达到MST，延长随访可能会显示差异；也可能是Ⅰ、Ⅱ期患者病例数较少，还不足以显示统计学差异。Cox逐步回归分析显示，TNM分期和肺癌细胞COX-2表达水平是影响本组NSCLC患者预后的危险因素。
p53基因是人体重要的抑癌基因，其编码的p53蛋白在正常细胞中含量极微，但在肿瘤细胞或转化细胞中常过度表达。研究报道，约45%~70%的NSCLC可检测到p53基因突变。p53蛋白表达与肺腺癌患者淋巴转移、肿瘤的低分化程度呈正相关[8]。可是，本组资料显示p53表达与NSCLC的组织学类型、分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移及患者的年龄、性别等因素无显著性相关。这可能与研究样本数量较少有关。
p53与患者预后之间的关系也存在不同观点。Yuan等[9]认为p53基因突变的NSCLC与纵隔或远处的淋巴结转移有关，且患者的存活时间明显缩短。也有研究认为p53基因突变和p53蛋白在NSCLC表达缺乏预后价值[10]。本研究显示，p53阳性患者的生存期稍长于p53阴性患者，但统计结果分析，p53与NSCLC患者的预后并无相关性。
研究发现，野生型p53可显著抑制COX-2蛋白及其mRNA表达，而突变型p53不能[11]。本组研究显示，NSCLC患者中p53与COX-2的蛋白表达无明显的相关性，不支持上述观点。
【】
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