安蓝风湿液提取工艺的研究

【摘要】  目的 以总固体量和淫羊藿苷含量为定量指标，研究安蓝风湿液的最佳提取工艺。方法 采用L9（34）正交试验方法进行工艺优选；用HPLC测定淫羊藿苷的含量。结果 最佳提取工艺为加45%食用酒精循环浸提2次，每次6天（2次/d，2h/次）。结论 该工艺先进实用，合理可行，可扩大试生产。

【关键词】  安蓝风湿液 淫羊藿苷 HPLC 正交试验

    安蓝风湿液是由邵阳市中医多年研究的风寒湿痹的有显著疗效的中药方剂。由安络小皮伞干菌丝复合物、绞股蓝、淫羊藿等8味药组成。具有活血通络、益肾健骨、除湿止痛之功效。用于治疗风寒湿痹。因方中各主要有效成分多溶于低浓度乙醇，且酒能温经通络，散寒止痛，有助于风寒湿痹的辅助治疗，故采用一定浓度的食用酒精为溶媒进行循环浸提，以所得总固体和淫羊藿的主要有效成分淫羊藿苷作为考察指标，采用L9（34）正交试验方法进行优选，再用综合加权评分法进行分析评价，得出合理、可行的浸提工艺。现报告如下

    1  仪器及材料

    1.1  仪器  Waters 1525高效液相色谱仪，美国Waters公司；AB204-N型天平、AG 135电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。

    1.2  试剂  甲醇（色谱纯，SCRC国药集团化学试剂有限公司，20060705），水为重蒸馏水，其余所用试剂均为分析纯。

    1.3  药材  安络小皮伞干菌丝复合物、绞股蓝、淫羊藿等药材均购于邵阳市药材有限公司；淫羊藿苷对照品（110737-200414）由药品生物制品检定所提供。

    2  方法与结果

    2.1  总固体测定方法  精密吸取25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量。

    2.2  淫羊藿苷含量测定

    2.2.1  色谱条件  色谱柱：Kromasil C18 （4.6mm×250mm，5μm）；柱温：35℃；流动相：甲醇-水（28：72）；流速：1.0ml/min；检测波长：270nm。

    2.2.2  对照品溶液的制备   精密称取淫羊藿苷对照品5.19mg置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（0.0519mg/ml）。

    2.2.3  供试品溶液的制备    精密吸取本品50ml，在水浴上蒸至约20ml，加10ml水，转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

    2.2.4  线性关系考察  精密吸取浓度为0.0519mg/ml的淫羊藿苷对照品溶液4、6、8、10、12、14μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以对照品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=100653.43C+41807.14，r=0.9996，线性范围：0.2076～0.7266μg。

    2.2.5  回收率试验  精密吸取已知含量供试品25ml，加入淫羊藿苷对照品适量，制备供试品溶液，测定峰面积，平均加样回收率为98.39%，RSD为1.93%（n=9）。

    2.3  浸提工艺研究

    2.3.1  实验设计  以醇提浓度、浸提次数、浸提时间为考察因素，以所得总固体和淫羊藿苷含量为考察指标，按L9（34）安排正交试验。因素水平见表1。 表1  浸提正交试验因素水平表

    2.3.2  实验方法与结果  按1/5处方量称取药材最粗粉45g（共9份），按因素水平表的规定进行循环提取，提取液滤过，滤液用45%食用酒精定容至200ml。测定所得总固体和淫羊藿苷含量。结果见表2。方差分析见表3。

    以D项作为误差项进行方差分析，结果见表3。

    直观分析表明，对安蓝风湿液循环浸提的影响因素为B>C>A；方差分析结果表明，因素B（浸提次数）对安蓝风湿液的循环浸提有非常显著性影响,因素A（醇提浓度）和因素C（浸提时间）有显著性影响。综合考虑能源、生产同期等，确定其最佳工艺组合为A2B2C2，即用45%食用酒精循环浸提2次，每次6天（2次/d，2h/次）。

    2.3.3  工艺验证  取10倍处方量的药材共3份，按所优选的工艺条件进行验证，得总固体量分别是：32.5mg/ml，33.2mg/ml，32.1mg/ml，RSD=1.71%；淫羊藿苷含量分别为：8.556μg/ml，8.611μg/ml，8.611μg/ml，RSD=0.37%。表明该工艺重现性好，稳定可行。表2  L9（34）正交试验及结果注：设总固体和淫羊藿苷的权重系数分别取为0.4和0.6，取两组中的最高值设为100，则y=0.4×（100-34.772+i）+0.6×（100-9.935+j）表3  方差分析表
注：F0.05（2,2）=19.00；F0.01（2,2）=99.00

    3  结果与讨论

    方中安络小皮伞干菌丝复合物为君药，其多含蛋白质，有人用UV法测定其含量，但方中绞股蓝等也含多量蛋白质，考虑到HPLC法准确性好，精密度高，故选择臣药淫羊藿中的淫羊藿苷作为正交试验的一个考察指标。

    从正交试验结果可以看出，醇提浓度越低，则所得总固体量越高，而淫羊藿苷含量越低，反之亦然，再综合考虑本制剂的功能主治，确定用45%食用酒精作为本工艺的浸提溶媒。

    以上试验得出醇提浓度、浸提次数、浸提时间三项均有显著性影响。通过正交试验方差分析及整个工艺过程中既要考虑到最大限度的提取有效成分，又要考虑降低成本，操作简单，故确定安蓝风湿液最佳提取工艺条件为用45%食用酒精循环浸提2次，每次6天，每天2次，每次2h。并按该工艺试制研究，结果表明该工艺可行，重现性好，可操作性强。

【】
  1 国家药典委员会. 中华人民共和国药典，一部. 北京：化学出版社，2005，229.

2 曹春林. 中药药剂学. 上海：上海技术出版社，1986,68-71.